抗?jié)h灘病毒中和性鼠-人嵌合抗體在擬南芥中的表達及其免疫學特性的初步研究.pdf

1、漢灘病毒（HTNV）主要引起腎綜合征出血熱（HFRS），迄今尚無特異、有效的治療藥物?？笻TNV鼠源性單克隆抗體（mAb），雖然有較好的抗病毒作用，但應用于人體可能產(chǎn)生抗鼠抗體。而人源性mAb制備困難、產(chǎn)量低，目前也難以應用?；蚬こ炭贵w在原核系統(tǒng)中表達雖然產(chǎn)量較高，但由于其受加工修飾功能的限制，會影響表達產(chǎn)物的生物學特性；而真核表達又存在表達量低的難題。運用合適的植物表達系統(tǒng)表達抗體不僅表達產(chǎn)量高，而且由于植物表達系統(tǒng)有良好的加工修飾

2、功能，其表達產(chǎn)物能保持良好的生物學特性。
　　本研究用基因工程技術構(gòu)建了鼠/人嵌合抗體基因，并將其導入擬南芥內(nèi)，嘗試在植物體內(nèi)表達，主要方法和結(jié)果如下：
　　1．將抗HTNV鼠源性mAb3G1的可變區(qū)基因及人抗體恒定區(qū)基因進行拼接，構(gòu)建了植物嵌合表達載體3G1MH-pCAMBIA2301，轉(zhuǎn)化入根瘤農(nóng)桿菌中，利用根瘤農(nóng)桿菌介導的抽真空轉(zhuǎn)基因技術轉(zhuǎn)化野生型擬南芥，獲得轉(zhuǎn)基因植株。提取T0代轉(zhuǎn)基因植株基因組DNA，應用針對輕、重

3、鏈序列的特異性引物進行PCR檢測，篩選出整合有目的基因的陽性植株。以輕、重鏈探針對RNA進行NorthernBlot檢測，檢測出完整的輕、重鏈RNA，證明轉(zhuǎn)基因植株構(gòu)建成功。
　　2.針對抗體輕、重鏈核苷酸序列設計特異性引物，對轉(zhuǎn)基因植物的cDNA進行實時熒光定量PCR檢測，結(jié)果顯示不同轉(zhuǎn)基因植株間的RNA轉(zhuǎn)錄量存在差異，挑選出輕、重鏈轉(zhuǎn)錄量較高的5株表達株系，通過以抗人Kappa鏈及抗人Fc段抗體分別做WesternBlot檢測