抗創(chuàng)傷弧菌單克隆抗體的制備與鑒定.pdf

1、創(chuàng)傷弧菌（Vibriovulnificus）是一種嗜鹽弧菌，廣泛存在于海水及海產(chǎn)品中，人體可通過生食海鮮或經(jīng)過肢體破損創(chuàng)口接觸海水、海產(chǎn)品而受其感染。常見于海上勞作的漁民及駐海演習(xí)人員從而引起敗血癥和軟組織感染。本菌對于糖尿病、酒精性肝病、肝硬化、肝炎、肝功能障礙患者的危害相當(dāng)嚴(yán)重,可引起創(chuàng)傷弧菌膿毒血癥，起病急，進展迅速，死亡率高[1]?？焖贉?zhǔn)確的早期診斷是指導(dǎo)臨床正確用藥從而達(dá)到理想治療效果的有力保證；同時，創(chuàng)傷弧菌的治療手段仍為經(jīng)

2、驗性的抗生素應(yīng)用，然而，隨著細(xì)菌對抗生素逐漸出現(xiàn)的不同程度的耐藥現(xiàn)象，找到一種非大劑量應(yīng)用抗生素的治療也成為亟待解決的問題。單克隆抗體用于疾病的診斷及治療已在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域得到廣泛開展，并收到了很好的效果。作為我國海域主要致病菌之一的創(chuàng)傷弧菌，至今未見有診斷與治療的單克隆抗體制劑問世，為了解決該菌感染的診斷及防治問題，本研究對其單克隆抗體進行了研究。具體試驗方法如下：
　　（1）通過動物免疫、細(xì)胞融合篩選克隆化及ELISA技術(shù)制備并鑒定

3、抗創(chuàng)傷弧菌的單克隆抗體。獲得了2株穩(wěn)定分泌抗創(chuàng)傷弧菌的雜交瘤細(xì)胞株，命名為1A2（IgG1）和2D6（IgG2a）。經(jīng)測定雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清及其誘生的腹水mAb效價分別為1×10-2，1×10-3和1×10-4，1×10-5。經(jīng)交叉試驗，2D6與溶藻弧菌、遲緩愛德華菌、鰻弧菌、溫和氣單胞菌以及嗜水氣單胞菌均不產(chǎn)生交叉反應(yīng)，可以應(yīng)用于創(chuàng)傷弧菌感染的快速檢測。
　?。?）以創(chuàng)傷弧菌分別感染乳鼠為模型，對1A2和2D6的治療保護效果進行

4、研究。結(jié)果顯示:1A2和2D6均能提高受創(chuàng)傷弧菌感染的乳鼠的存活率，分別為62.50％和37.50％，1A2具有明顯的保護作用。
　　本實驗通過雜交瘤技術(shù)共獲得2株分泌抗創(chuàng)傷弧菌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株1A2和2D6。2株雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)上清及腹水能在較長時間內(nèi)基本保持穩(wěn)定。其中，1A2的培養(yǎng)上清、腹水效價及親和力均高于2D6；2D6與溶藻弧菌、遲緩愛德華氏菌、鰻弧菌、溫和氣單胞菌以及嗜水氣單胞菌均不產(chǎn)生交叉反應(yīng)，可以應(yīng)用于創(chuàng)傷弧