抗HoxA1單克隆抗體的制備、鑒定.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、[目的]
　　利用合成抗原GST-HoxA1免疫BALB/c小鼠，制備針對HoxA1蛋白的單克隆抗體，通過Westen bloting檢測其特異性，F(xiàn)ITC熒光素標記抗體，免疫熒光染色，研究其在HoxA1蛋白檢測中的應用價值。
　　[方法與結(jié)果]
　　GST-HoxA1合成抗原免疫BALB/c小鼠，采用傳統(tǒng)單克隆抗體制備方法，通過細胞融合，HAT選擇，有限稀釋法克隆擴增，獲得穩(wěn)定分泌高純度抗HoxA1單克隆抗體的雜交瘤

2、細胞株。利用小鼠體內(nèi)接種雜交瘤細胞制備含特異性抗體的腹水，通過辛酸—硫酸銨法純化，得到優(yōu)質(zhì)單克隆抗體。通過間接ELISA法測定抗體效價，Westen bloting檢測其的特異性。經(jīng)測定抗HoxA1單克隆抗體4D5效價為1:102400，Westen bloting結(jié)果發(fā)現(xiàn)4D5可以特異性結(jié)合靶細胞Hela中HoxA1蛋白，與載體蛋白GST無交叉反應；利用FITC熒光素標記抗體，免疫熒光染色結(jié)果顯示實驗組腫瘤細胞明顯熒光表達，對照組細胞

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