生理鹽水、高滲氯化鈉和羥乙基淀粉復(fù)蘇失血性休克大鼠對(duì)Treg、Th1-Th2及Tc1-Tc2早期影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：失血性休克復(fù)蘇后免疫系統(tǒng)的變化對(duì)后續(xù)的治療具有重要的指導(dǎo)意義。因此我們建立大鼠失血性休克模型,并分別利用生理鹽水(NS),高滲氯化鈉(HTS)和羥乙基淀粉(HES)進(jìn)行早期液體復(fù)蘇,利用流式細(xì)胞技術(shù)觀察不同液體復(fù)蘇后對(duì)外周血和脾臟中Treg,Th1／Th2,Tc1／Tc2早期(復(fù)蘇后2.5h)的干預(yù)作用,以評(píng)估上述3種液體對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)的影響。
　　 方法：利用頸動(dòng)脈可控性放血方法制作大鼠失血性休克模型,并模擬急救流程將實(shí)

2、驗(yàn)分成失血期,早期液體復(fù)蘇期,輸血期和觀察期四個(gè)階段。根據(jù)早期液體復(fù)蘇期給予的液體不同分為NS組,HTS組和HES組,另外再設(shè)假手術(shù)(sham)組和對(duì)照(control)組,每組7只大鼠。假手術(shù)組只接受與各液體復(fù)蘇組相同的麻醉、頸動(dòng)脈和股靜脈置管以及肝素化操作,沒有放血和補(bǔ)液補(bǔ)血步驟,對(duì)照組僅接受麻醉操作,無動(dòng)靜脈置管及其他操作,兩組觀察時(shí)間與各補(bǔ)液組模型持續(xù)的總時(shí)間相同。輸血完成后在嚴(yán)密血流動(dòng)力學(xué)監(jiān)護(hù)下觀察2h后,直接頸動(dòng)脈抽血處死各

3、組大鼠,對(duì)照組心臟穿刺抽血處死。無菌分離并獲取外周血單核細(xì)胞和脾細(xì)胞懸液,利用3色熒光流式技術(shù)檢測(cè)其中(CD4+CD25+Foxp3+)Treg數(shù)量變化。將外周抗凝血和脾細(xì)胞懸液分別加入到含有佛波酯(PMA)、離子霉素(Ionomycin)、莫能霉素(Monensin)和胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中,37℃,5％CO2培養(yǎng)4h,3色熒光流式技術(shù)檢測(cè)外周血和脾臟Th1／Th2,Tc1／Tc2的變化。
　　 結(jié)果：
　　

4、 1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷慕?br>　　 成功建立分別采用NS,HTS和HES進(jìn)行早期液體復(fù)蘇的大鼠失血性休克模型,3種液體復(fù)蘇均可立即產(chǎn)生有效的復(fù)蘇作用,迅速提高平均動(dòng)脈壓(MAP),改善血流動(dòng)力學(xué)狀態(tài),并維持其基本穩(wěn)定至觀察期結(jié)束。
　　 2.不同實(shí)驗(yàn)組外周血和脾臟Treg檢測(cè)結(jié)果
　　 外周血中,與control組相比,sham組Treg含量升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.031)。NS,HTS和HES分別復(fù)蘇后早

5、期外周血Treg含量相近,差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),但它們均低于control和sham組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(與 control相比:P=0.023,0.02,0.032；與sham相比3組均P<0.001)。
　　 脾臟中,與control組相比,sham組Treg水平略低,差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。HTS組脾臟中Treg的含量與 control相近,差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。NS和HES組脾臟

6、Treg的含量低于control組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.032,P=0.028)。sham組的Treg低于HTS組,高于NS和HES組,差異沒有顯示出統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 3.不同實(shí)驗(yàn)組外周血和脾臟Th1／Th2,Tc1／Tc2檢測(cè)結(jié)果
　　 外周血Th1,Th2細(xì)胞方面,sham組與control組相比差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與control和sham組相比,NS、HTS和HES組Th1

7、／Th2均降低,但與control組的差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),與sham組的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.012,0.025,0.008)。
　　 外周血Tc1,Tc2細(xì)胞方面,sham組與control組沒有統(tǒng)計(jì)差異(P>0.05)。與control和sham組相比,只有HTS組Tc1／Tc2有升高趨勢(shì),但沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),NS和HES組Tc1／Tc2沒有觀察到明顯的變化趨勢(shì)(P>0.05)。
　

8、　 脾臟Th1,Th2細(xì)胞方面,sham組與control組相比Th1／Th2升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.016)。與control組相比,HTS組Th1／Th2明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001),HES組Th1／Th2也有升高趨勢(shì),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.047),NS組Th1／Th2無明顯變化,差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與sham組相比,HTS有升高趨勢(shì),HES組無明顯變化,差異都沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.

9、05),NS組顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.012)。
　　 脾臟Tc1,Tc2細(xì)胞方面,sham組與control組相比差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與control和sham組相比,HTS組Tc1／Tc2顯著升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001,P=0.002),NS和HES組Tc1／Tc2沒有觀察到明顯的變化趨勢(shì)(P>0.05)。
　　 結(jié)論：失血性休克后,與NS和HES復(fù)蘇相比,HTS復(fù)蘇后早期(