中華眼鏡蛇蛇毒免疫調(diào)節(jié)作用及機制探討.pdf

1、目的:探究中華眼鏡蛇蛇毒(Naja naja atra venom, NNAV)的免疫調(diào)節(jié)作用及機制。
　　方法:通過碳粒廓清實驗,ELISA檢測血清補體C3,自然殺傷(Natural killer,NK)細胞殺傷實驗,血清抗綿羊紅細胞(Sheep red blood cell, SRBC)抗體IgM測定實驗,二硝基氟苯(Dinitrofluorobenzene,DNFB)誘導遲發(fā)型超敏反應(delayed-type of hyp

2、ersensitivity, DTH)以及CCK-8法檢測淋巴細胞增殖實驗檢測NNAV對正常小鼠非特異性免疫功能與特異性免疫功能的影響;通過流式分析脾臟T淋巴細胞亞型,ELISA檢測血清IgG與IgM含量,對脾臟切片進行H&E染檢測NNAV對地塞米松誘導免疫低下小鼠免疫功能的影響;通過CCK-8檢測細胞活力,碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)染色檢測T細胞周期,二醋酸鹽琥珀酰亞胺脂(Carboxy Fluoroscein

3、 Succinimidyl Ester,CFSE)染色檢測CD4與CD8 T細胞增殖,ELISA檢測淋巴細胞培養(yǎng)上清中IFN-γ、IL-4與IL-17含量,流式分析Th1、Th2與Th17分化對NNAV免疫調(diào)節(jié)機制進行探究。
　　結果:在正常機體,NNAV(20μg/kg)能顯著增加碳粒廓清指數(shù)α;NNAV(20μg/kg、40μg/kg)對補體C3的生成具有促進作用;NNAV(40μg/kg、80μg/kg)對NK細胞的殺傷作用

4、呈劑量依賴性增強作用;NNAV(40μg/kg、80μg/kg)促進抗SRBC抗體IgM的生成,對B細胞的增殖也有促進作用,與劑量呈正相關;NNAV(40μg/kg、80μg/kg)顯著抑制遲發(fā)型超敏反應造成的耳廓腫脹,對T細胞增殖呈劑量依賴性抑制作用。在地塞米松造成的免疫低下機體,NNAV(80μg/kg)對CD4與CD8 T細胞均有抑制作用,且對CD8 T細胞的抑制作用強于CD4 T細胞,使CD4/CD8比例恢復至正常水平;NNAV

5、(20μg/kg、40μg/kg)對地塞米松造成的IgG、IgM降低有明顯的逆轉作用,對生發(fā)中心(Germinal Center, GC)的形成也有恢復作用。機制研究結果顯示,在不影響細胞活力的前提下,NNAV(80μg/kg)可將T細胞周期阻滯在G0/G1期,對CD4與CD8 T細胞增殖均有抑制作用,ELISA結果顯示NNAV能促進IFN-γ與IL-4的生成,抑制IL-17的生成,流式結果也證實NNAV對Th1與Th2的分化有促進作用