復(fù)方紅景天配方篩選及免疫調(diào)節(jié)作用研究.pdf

1、目的：
　　隨著人們對(duì)疾病治療認(rèn)識(shí)的轉(zhuǎn)變，應(yīng)用免疫增強(qiáng)劑調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的想法，引起了學(xué)者們廣泛地關(guān)注。免疫增強(qiáng)劑（immuno stimulants），經(jīng)常被用來作為腫瘤疾病的治療藥物，是一種單獨(dú)或同時(shí)與抗原使用的時(shí)候能增強(qiáng)機(jī)體免疫應(yīng)答的物質(zhì)。順鉑、環(huán)磷酰胺、氮芥等細(xì)胞毒類抗腫瘤藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞缺乏足夠的選擇性，因此此類藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞均具有殺傷作用，進(jìn)而對(duì)患者的生活質(zhì)量造成嚴(yán)重影響。長(zhǎng)期使用化療藥物可降低機(jī)體免疫調(diào)節(jié)功能

2、,其不良表現(xiàn)主要包括骨髓抑制、白細(xì)胞減少、血小板減少等。研究者們通過體內(nèi)、體外免疫功能調(diào)節(jié)實(shí)驗(yàn)力求研發(fā)安全可靠的具有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能的植物性藥物，此種類型的天然免疫增強(qiáng)劑有望改善化療藥物誘導(dǎo)的機(jī)體免疫調(diào)節(jié)能力抑制作用。
　　本論文通過體外淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、NK細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)篩選復(fù)方紅景天（Composite Rhodiola rosea）最優(yōu)配方，與此同時(shí)，根據(jù)初步實(shí)驗(yàn)中篩選出的最優(yōu)發(fā)酵條件，發(fā)酵人參和紅景天。通過體內(nèi)免疫功能調(diào)節(jié)實(shí)

3、驗(yàn)，比較發(fā)酵復(fù)方紅景天（Fermented Composite Rhodiola rosea，F(xiàn)CRr）和未發(fā)酵復(fù)方紅景天（Non-fermented Composite Rhodiola rosea，NCRr）免疫功能增強(qiáng)作用及其作用機(jī)制。
　　方法：
　　1.采用活性酵母分別提取紅景天和人參。通過析因設(shè)計(jì)試驗(yàn)，根據(jù)各組復(fù)方紅景天對(duì)體外小鼠免疫功能的測(cè)定值，選擇復(fù)方紅景天最優(yōu)配方組合。
　　2.采用血清藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法

4、，取9只大鼠，按動(dòng)物實(shí)驗(yàn)推薦劑量的5倍劑量給大鼠灌胃配伍組成的9組組方藥物，連續(xù)灌胃5天，末次給藥2小時(shí)，使用乙醚麻醉，無菌條件下摘取眼球取血，收集含藥血清。采用體外MTT比色法，檢測(cè)9組復(fù)方配伍組對(duì)Con A、LPS誘導(dǎo)的脾細(xì)胞增殖能力及NK細(xì)胞殺傷能力。
　　3.體內(nèi)免疫功能調(diào)節(jié)實(shí)驗(yàn)方法：按照隨機(jī)分組原則，將60只雄性小鼠分為空白對(duì)照組，免疫抑制模型組，F(xiàn)CRr高、低劑量組，NCRr高、低劑量組，每組各10只。實(shí)驗(yàn)第一天至第三

5、天腹腔注射環(huán)磷酰胺（100mg/kg），制作小鼠免疫功能低下模型，此后持續(xù)灌胃各組藥物15天，測(cè)定各組小鼠臟器比值、外周血白細(xì)胞數(shù)、淋巴細(xì)胞增值能力、NK細(xì)胞殺傷活性。采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定白介素-2(IL-2)，干擾素（IFN-γ）,腫瘤壞死因子(TNF-α)。
　　結(jié)果：
　　1.人參和紅景天最優(yōu)組合比例篩選結(jié)果表明：紅景天和人參復(fù)方組與各自的單味組相比，可以顯著提高淋巴細(xì)胞增殖能力，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

6、＜0.01）。與空白對(duì)照組比較，在未進(jìn)行發(fā)酵處理的各組藥物中，未發(fā)酵紅景天高劑量+未發(fā)酵人參高劑量配伍組（紅景天0.6 g/kg，人參1 g/kg）可以顯著增加ConA、LPS誘導(dǎo)的T、B淋巴細(xì)胞增殖能力及NK細(xì)胞殺傷活性（P＜0.01）；未發(fā)酵紅景天低劑量+未發(fā)酵人參低劑量配伍組（紅景天0.3 g/kg，人參0.5 g/kg）可以顯著增加ConA、LPS誘導(dǎo)的T、B淋巴細(xì)胞增殖能力及NK細(xì)胞殺傷活性（P＜0.01）。與空白對(duì)照組相比，

7、經(jīng)過發(fā)酵處理的各組藥物中，發(fā)酵紅景天高劑量+發(fā)酵人參高劑量配伍組可以顯著增加 ConA、LPS誘導(dǎo)的T、B淋巴細(xì)胞增殖能力及 NK細(xì)胞殺傷活性（P＜0.01）；發(fā)酵紅景天低劑量+發(fā)酵人參低劑量配伍組比空白對(duì)照組顯著增加ConA、LPS誘導(dǎo)的T、B淋巴細(xì)胞增殖能力及NK細(xì)胞殺傷活性（P＜0.01）。
　　2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：環(huán)磷酰胺對(duì)小鼠外周血中的白細(xì)胞數(shù)具有顯著的抑制作用，F(xiàn)CRr高、低劑量組及NCRr高、低劑量組均可以顯著提高

8、由環(huán)磷酰胺抑制的，小鼠外周血白細(xì)胞數(shù)量，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。FCRr高、低劑量組小鼠外周血白細(xì)胞數(shù)均高于NCRr高、低劑量組，與NCRr低劑量組相比，F(xiàn)CRr低劑量組可以顯著提高白細(xì)胞數(shù)量，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01)。
　　3．淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力檢測(cè)結(jié)果表明：與空白對(duì)照組相比，環(huán)磷酰胺可以顯著抑制由Con A，LPS誘導(dǎo)的小鼠T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞增殖能力，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與環(huán)磷酰胺

9、組比較，F(xiàn)CRr高、低劑量組及NCRr高、低劑量組均可以顯著提高免疫抑制模型小鼠T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞增殖能力，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。FCRr高、低劑量組對(duì)小鼠T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞的增殖能力均高于NCRr高、低劑量組對(duì)小鼠T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞增殖能力，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　4. NK細(xì)胞殺傷活性檢測(cè)結(jié)果表明：與空白對(duì)照組相比，環(huán)磷酰胺可以顯著抑制小鼠 NK細(xì)胞殺傷活性，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

10、（P＜0.01）。與環(huán)磷酰胺組相比FCRr高、低劑量組及NCRr高、低劑量組均可以顯著提高免疫抑制模型小鼠的NK細(xì)胞殺傷活性，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。FCRr高、低劑量組提高小鼠NK細(xì)胞殺傷活性能力均高于NCRr高、低劑量組，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　5.白細(xì)胞介素-2（IL-2）含量的測(cè)定結(jié)果表示：與空白對(duì)照組相比，環(huán)磷酰胺可以顯著抑制小鼠血清IL-2的含量，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

11、與環(huán)磷酰胺組相比FCRr高、低劑量組及NCRr高、低劑量組均可以顯著提高免疫抑制模型小鼠，血清 IL-2的含量，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。FCRr高、低劑量組小鼠血清IL-2的含量均高于NCRr高、低劑量組小鼠血清IL-2的含量，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　6.干擾素（IFN-γ）含量的測(cè)定結(jié)果表示：與空白對(duì)照組相比，環(huán)磷酰胺可以顯著抑制小鼠血清 IFN-γ的含量，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

12、與環(huán)磷酰胺組相比，F(xiàn)CRr高、低劑量組可以顯著提高免疫抑制模型小鼠，血清IFN-γ的含量，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與環(huán)磷酰胺組相比，NCRr高劑量組可以顯著提高免疫抑制模型小鼠血清IFN-γ的含量，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。FCRr高、低劑量組小鼠血清IFN-γ的含量均高于NCRr高、低劑量組小鼠血清IFN-γ的含量，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　7.腫瘤壞死因子（TNF-α）含量的測(cè)定結(jié)果

13、表示：與空白對(duì)照組相比，環(huán)磷酰胺可以顯著抑制小鼠血清TNF-α的含量，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與環(huán)磷酰胺組相比FCRr高、低劑量組及NCRr高、低劑量組均可以顯著提高免疫抑制模型小鼠，血清TNF-α的含量，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。FCRr高、低劑量組小鼠血清TNF-α的含量均高于NCRr高、低劑量組小鼠血清TNF-α的含量，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　結(jié)論：
　　1復(fù)方紅景天、人參