鼓階途徑內(nèi)耳干預(yù)的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ).pdf

1、耳聾是人類常見殘疾之一，其嚴重影響著人們的生活質(zhì)量。目前臨床上耳聾治療的主要手段有佩戴助聽器與電子耳蝸植入等，但它們都有局限性。干細胞可以作為耳聾治療的一種手段，研究發(fā)現(xiàn)鼓階途徑移植進入外淋巴的干細胞可以遷移到外淋巴區(qū)域，但遷移機理尚不明確。為了更好地研究鼓階途徑干細胞移植對耳聾的治療作用，我們選擇在進化上與人類接近的豬為模式動物，觀察移植進入的干細胞在耳蝸內(nèi)的存活與分布情況。
　　 第一章阿米卡星致聾大鼠耳蝸鼓階上皮超微結(jié)構(gòu)變

2、化
　　 目的：藥物性耳聾是一種常見的聽力損失類型，研究表明其內(nèi)耳形態(tài)主要表現(xiàn)為毛細胞凋亡，螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元退化等。通過干細胞移植來恢復(fù)受損或缺失的內(nèi)耳細胞是一種潛在的治療手段。本課題組前期實驗表明干細胞移植到藥物致聾的實驗動物鼓階，細胞可以向螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元以及柯蒂氏器區(qū)域遷移，而移植對照組實驗動物內(nèi)耳干細胞很少發(fā)現(xiàn)遷移現(xiàn)象，也就是說藥物致聾可以促進干細胞在內(nèi)耳的遷移，我們推測這種遷移的發(fā)生與鼓階上皮結(jié)構(gòu)的改變有關(guān)。內(nèi)耳的鼓階

3、與螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元以及柯蒂氏器區(qū)域不相通，干細胞由鼓階遷移至這些區(qū)域的途徑還不清楚。本研究是通過觀察藥物致聾后與正常大鼠的鼓階靠近螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元與柯蒂氏器區(qū)域上皮的結(jié)構(gòu)變化，發(fā)現(xiàn)干細胞移植到藥物致聾大鼠內(nèi)耳后發(fā)生遷移的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。
　　 材料與方法：實驗組20只7日齡SPF級SD大鼠連續(xù)7天以200mg/kg/day劑量腹腔注射硫酸阿米卡星，對照組10只腹腔注射同等體積的生理鹽水。停藥后即刻、7天、14天、21天與28天分別測試

4、聽力，然后處死實驗動物，一側(cè)耳用4％多聚甲醛固定用于冰凍切片，另一側(cè)耳用2.5％戊二醛固定后用于電鏡觀察。
　　 結(jié)果：對照組實驗動物聽力正常，平均閾值在40 dBL(SPL)；內(nèi)耳柯蒂氏器完整，毛細胞無缺損，螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元數(shù)目無減少；鼓階上皮大都排列較緊密，小部分上皮之間存在間隙，但是間隙較小，各組形態(tài)變化不大。實驗組為極重度感音神經(jīng)性聾，平均閾值在105 dBL(SPL)；內(nèi)耳柯蒂氏器破壞，毛細胞缺失，原來柯蒂器所在區(qū)域被

5、上皮取代；鼓階上皮間隙經(jīng)歷了從排列相對緊密一松弛一相對緊密的過程，空洞的數(shù)目也經(jīng)歷由少到多再到少的過程。
　　 結(jié)論：氨基糖苷類藥物不僅可以導(dǎo)致柯蒂器細胞的缺失，而且還可以造成鼓階側(cè)靠近螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元與柯蒂氏器側(cè)上皮的間隙擴大，這種改變是可逆的，隨著時間的延長可以自我恢復(fù)。
　　 第二章豬耳后入路暴露中耳腔可行性探索
　　 目的：在第一部分研究及本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)的基礎(chǔ)上，發(fā)現(xiàn)豬耳在發(fā)育和形態(tài)結(jié)構(gòu)上與人類相似

6、，可利用豬耳為研究對象來模擬人類的聽覺疾病。本研究主要為了探索從小型豬耳后入路解剖途徑進入中耳腔的可行性。
　　 材料與方法：豬手術(shù)入路探索選取2月齡聽力正常體重5-10kg健康貴州小香豬6只，每只豬右耳用于外淋巴移植，左耳當做空白對照。分別在術(shù)后1、2與4周測定實驗動物聽力變化，然后通過免疫熒光的方法觀察手術(shù)對內(nèi)耳的損傷。
　　 結(jié)果：免疫熒光顯示手術(shù)沒有引起內(nèi)耳毛細胞造成缺失，但是術(shù)后實驗耳與對照耳平均閾值均比空白對

7、照組提高15 dBL，該差別具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)論：盡管鼓階途徑外淋巴移植后在一定程度上提高了聽力閾值，耳后入路進入中耳可以作為暴露內(nèi)耳的一種可行的方法。
　　 第三章正常豬鼓階途徑干細胞移植的初步觀察
　　 目的：前面我們已經(jīng)探討了豬做為動物模型在耳科研究中的優(yōu)勢，同時摸索出一種可行的手術(shù)入路，本實驗的目的在于觀察干細胞通過鼓階途徑移植進入豬內(nèi)耳后的存活與分布情況。
　　 方法與材料：干細胞移植實

8、驗中選取2月齡聽力正常體重5-10kg健康貴州小香豬6只，每只豬右耳用于干細胞移植，左耳當做空白對照。分別在術(shù)后1、2與4周測定實驗動物聽力變化，然后通過免疫熒光的方法觀察干細胞的存活與分布。
　　 結(jié)果：干細胞移植后實驗耳比對照耳平均閾值提高15 dBL，與先前外淋巴組無差別；全耳蝸切片后免疫熒光未觀察到通過鼓階途徑移植進入的干細胞在外淋巴中存活，實驗中的細節(jié)還需改進然后做進一步的觀察。
　　 結(jié)論：未發(fā)現(xiàn)干細胞在內(nèi)耳