雞內(nèi)耳發(fā)育的基因調(diào)控與干預(yù).pdf

1、生物體正是依賴于它自身基因表達(dá)在時間上和空間上的調(diào)控，才得以正常分化、發(fā)育、繁殖和調(diào)節(jié)代謝。在脊椎動物的內(nèi)耳發(fā)育中，細(xì)胞分化命運(yùn)的決定有賴于復(fù)雜的基因調(diào)節(jié)通路，此調(diào)節(jié)通路涉及Wnt家族。Axin2是正規(guī)的Wnt調(diào)節(jié)通路中一個副調(diào)節(jié)因子，它通過促進(jìn)β-catenin的降解，抑制信號的傳導(dǎo)。我們發(fā)現(xiàn)了一個雞的等位基因cAxin2，于HH-14+期，它初始表達(dá)在發(fā)育內(nèi)耳的耳杯中，并在內(nèi)耳的形成及進(jìn)一步耳囊的分化過程中顯示了一個動態(tài)的表達(dá)方式。

2、在這項(xiàng)研究中，我們通過應(yīng)用活體電穿孔技術(shù)操控基因在耳囊中表達(dá)的方法，研究了用RNA interference(RNAi)誘導(dǎo)靶基因沉默的可行性。我們的結(jié)果顯示，應(yīng)用增強(qiáng)的綠熒光蛋白、cAxin2和短發(fā)夾RNA構(gòu)建質(zhì)粒通過活體電穿孔技術(shù)轉(zhuǎn)染后，在耳囊中，可以看到很強(qiáng)的綠熒光信號。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，用原位雜交技術(shù)檢測基因cAxin2、Paired Box2(cPax2)及Bone Morphogenetic Protein 4(cBMP4)