動(dòng)脈粥樣硬化NPC1L1基因的表達(dá)及V55L基因多態(tài)性研究.pdf

1、動(dòng)脈粥樣硬化(As)是嚴(yán)重危害人們健康的一類疾病，在我國60歲以上人群中發(fā)病率高達(dá)79.9％，防治As成為醫(yī)學(xué)界共同關(guān)注的重要課題。動(dòng)脈粥樣硬化與血脂代謝密切相關(guān)。目前已知高脂血癥和高膽固醇血癥是As的危險(xiǎn)因素。特別是高膽固醇血癥危害極大。因此，干預(yù)膽固醇吸收或代謝途徑將有效防治As的發(fā)生和發(fā)展。研究發(fā)現(xiàn)Niemann-PickC1-Like1(NPC1L1)基因在腸腔膽固醇向腸上皮刷狀緣膜的攝取中扮演重要角色，NPCILl基因還是膽固

2、醇吸收抑制劑依澤替米貝(ezetimibe)作用的對(duì)象。腸內(nèi)膽固醇吸收特異性抑制劑是未來阻止動(dòng)脈粥樣硬化和心血管疾病的重要藥物。 冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病(冠心病，CHD)是一種多因素疾病，由環(huán)境因素和遺傳因素共同作用引起。目前的研究越來越多的致力于尋找CHD和某些基因多態(tài)性之間的關(guān)系，以期探求CHD的最終發(fā)病機(jī)制。脂質(zhì)代謝紊亂是致動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病發(fā)生的最重要的危險(xiǎn)因素，目前關(guān)于影響脂質(zhì)代謝的基因多態(tài)性和冠心病之間的關(guān)系是研

3、究熱點(diǎn)。本研究通過檢測(cè)高脂血癥和動(dòng)脈粥樣硬化大鼠小腸組織中NPCIL1mRNA表達(dá)，以期了解NPC1L1對(duì)血脂代謝和動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生的關(guān)系；并通過研究V55L基因在冠心病脂質(zhì)代謝紊亂患者中的多態(tài)性，以其了解V55L在中國冠心病患者中是否存在多態(tài)性現(xiàn)象及其與血脂紊亂之間的關(guān)系。為進(jìn)一步了解NPC1L1在血脂代謝和動(dòng)脈粥樣硬化的作用奠定基礎(chǔ)。 對(duì)象和方法： 一、研究對(duì)象 1.健康清潔級(jí)雄性Wistar大鼠，體重(25

4、0±50)g，隨機(jī)分成3組，每組10只。分別復(fù)制單純高脂血癥和動(dòng)脈粥樣硬化及正常普食對(duì)照大鼠模型 2.2005年5月-11月我院心血管內(nèi)科住院確診的冠心病患者，對(duì)照組是同期非心血管疾病的門診體檢和住院排除冠心病者。本研究共收集符合條件的冠心病患者129例及對(duì)照組107例，其中男性147例，女性89例，平均年齡41-72歲(56.1±12.6)歲。冠心病患者嚴(yán)格按照1981年全國冠心病診斷標(biāo)準(zhǔn)確定。129例患者中有27例行冠狀動(dòng)脈

5、造影證實(shí)。 二、方法和指標(biāo) (一)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分 1.采用高脂飼料復(fù)制單純高脂血癥大鼠模型；高脂飼料+腹腔注射VitD復(fù)制As大鼠模型；普通飼料喂養(yǎng)復(fù)制正常對(duì)照大鼠模型 2.病理檢測(cè)三組大鼠模型主動(dòng)脈和冠狀動(dòng)脈 3.血清生化檢測(cè)三組大鼠模型血脂指標(biāo) 4.半定量RT-PCR方法分別檢測(cè)三組大鼠模型小腸組織中NPC1L1mRNA的表達(dá) 5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析三組大鼠模型NPC1L1mRNA表達(dá)差

6、異 (二)臨床病人研究 1.血清生化檢測(cè)129例冠心病患者和107例對(duì)照組血脂指標(biāo) 2.PCR方法擴(kuò)增236例臨床標(biāo)本目的基因 3.限制性內(nèi)切酶法酶切擴(kuò)增目的基因NPC1L1 4.酶切產(chǎn)物進(jìn)行DNA測(cè)序 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 (一)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分 1.病理觀察結(jié)果：14周病理檢測(cè)見動(dòng)脈粥樣硬化組大鼠動(dòng)脈內(nèi)粥樣斑塊形成；單純高脂和正常普食組動(dòng)脈無異常 2.生化檢測(cè)結(jié)果：14周血

7、清生化檢測(cè)動(dòng)脈粥樣硬化組和單純高脂組大鼠TC、TG、LDL-C均明顯高于正常普食組大鼠、HDL-C低于正常普食組大鼠；而動(dòng)脈粥樣硬化組和單純高脂組大鼠各指標(biāo)無明顯差異 3.基因表達(dá)分析：半定量RT-PCR方法檢測(cè)三個(gè)組別大鼠小腸組織中均存在NPC1L1mRNA基因表達(dá)；動(dòng)脈粥樣硬化組和單純高脂血癥組大鼠小腸組織中NPC1L1 mRNA表達(dá)明顯高于正常對(duì)照大鼠(P＜0.05)；單純高脂飲食和動(dòng)脈粥樣大鼠小腸組織中NPC1L

8、1mRNA表達(dá)之間無明顯差異(P＞0.05) (二)臨床病人研究 1.生化檢測(cè)結(jié)果：臨床血脂檢測(cè)冠心病組患者HDL-C指標(biāo)低于對(duì)照組；TG、TC、LDL-C、ApoA、ApoB無明顯差異 2.NPC1L1基因多態(tài)性分析：多聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片斷長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)方法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)人群NPC1L1基因V55L變異的三種基因型中，V55L無變異，均為VV型。 四、結(jié)論 (一)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分

9、 1.采用高脂飼料+一次性腹腔注射VitD法可成功復(fù)制動(dòng)脈粥樣硬化大鼠模型 2.動(dòng)脈粥樣硬化組和單純高脂組大鼠TC、TG、HDL-C、LDL-C各指標(biāo)與正常普食組大鼠存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；但動(dòng)脈粥樣硬化組和單純高脂組大鼠各指標(biāo)無明顯差異 3.血脂代謝紊亂與小腸組織中NPC1L1的高表達(dá)有關(guān)，NPC1L1高表達(dá)促進(jìn)了小腸組織膽固醇的吸收； 4.動(dòng)脈粥樣硬化組NPC1L1表達(dá)較正常對(duì)照組增高；但與單純高脂組表達(dá)無顯著差