RAGE基因-374T-A多態(tài)性與頸動脈粥樣硬化的相關(guān)性分析.pdf

1、急性腦梗死(acute cerebral infarction)是我國常見病和多發(fā)病，且發(fā)病率逐年增加，其發(fā)病率和致殘率居首位。頸動脈粥樣硬化(carotid atherosclerosis)是急性腦梗死的常見原因。研究發(fā)現(xiàn)，頸動脈粥樣硬化的發(fā)生與動脈內(nèi)皮功能異常密切相關(guān)。炎癥機(jī)制參與了血管內(nèi)皮損傷，并導(dǎo)致動脈粥樣硬化的形成和進(jìn)展。晚期糖基化終末產(chǎn)物(Advanced glycation end products，AGEs)能與細(xì)胞表面

2、受體結(jié)合，激活一系列信號傳導(dǎo)系統(tǒng)，從而加重血管內(nèi)皮損傷，誘導(dǎo)動脈粥樣硬化的形成。晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(receptor advanced glycationend-products，RAGE)能與AGEs、鈣粒蛋白和淀粉樣蛋白等配體特異性結(jié)合，激活下游的核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB(transcription factor nuclear factor-κB，NF-κB)，繼而增強(qiáng)細(xì)胞黏附分子-1（intercellular adhensio

3、n molecule-1，ICAM-1）、纖溶酶原激活物抑制劑-1（plasminogen activitor inhibitor-1，PAI-1）及單核細(xì)胞趨化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1）、血管細(xì)胞粘附分子(vascularcell adhesion molecule1，VCAM-1)等炎癥介質(zhì)表達(dá)，啟動并加劇動脈粥樣硬化病理過程，同時誘導(dǎo)基質(zhì)金屬蛋白酶表達(dá)，加劇動脈粥樣

4、硬化斑塊的不穩(wěn)定性。RAGE基因定位于染色體6p21.3，共含有11個外顯子和10個內(nèi)含子，長約3.27kb。已有超過30多種RAGE基因的單核苷酸多態(tài)性(single nucleotidepolymorphism，SNP)位點被發(fā)現(xiàn)，其中位于啟動子區(qū)及外顯子區(qū)域的SNP能夠影響RAGE基因的表達(dá)和功能，其中最受到關(guān)注的主要有-429T/C(rs1800625)、-374T/A(rs1800624)和G82S(rs2070600)等3種

5、;此外，RAGE基因的表達(dá)還受到RAGE剪切變異體的調(diào)控。血清可溶性RAGE(soluble RAGE，sRAGE)能競爭性結(jié)合RAGE，繼而緩解下游的炎癥反應(yīng)，從而延緩動脈粥樣硬化過程。此外，新近發(fā)現(xiàn)的鈣粒蛋白超家族成員S100A12（extracellular newly identified RAGE binding protein，EN-RAGE）作為一種促炎癥因子，與RAGE特異性結(jié)合，增強(qiáng)下游的炎癥信號通路，加重動脈粥樣硬化

6、的過程，并與動脈粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性密切相關(guān)。
　　目的：
　　本研究通過對急性腦梗死和正常對照組進(jìn)行RAGE-374T/A基因多態(tài)性、血清sRAGE和EN-RAGE水平進(jìn)行檢測，并測量兩組患者頸動脈內(nèi)膜-中膜厚度(IMT)，對以下問題進(jìn)行探討:
　　1、通過分析急性腦梗死和正常對照兩組間的RAGE-374T/A基因多態(tài)性，探討RAGE-374T/A基因多態(tài)性對急性腦梗死發(fā)病的影響;
　　2、通過分析急性腦梗死不

7、同亞型、有無合并糖尿病及頸動脈粥樣硬化等亞組間的RAGE-374T/A基因多態(tài)性及等位基因頻率，探討RAGE-374T/A基因亞型對急性腦梗死的影響;
　　3、通過分析急性腦梗死有無頸動脈粥樣硬化、有無合并糖尿病及不同基因亞型間血清sRAGE、EN-RAGE水平，探討sRAGE、EN-RAGE與頸動脈粥樣硬化及RAGE-374T/A基因多態(tài)性的相關(guān)性。
　　4、采用Logistic回歸分析探討頸動脈粥樣硬化的危險因素;

8、>　　方法：
　　1、回顧性分析自2011年至2015年在青島市中心醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科收治的急性腦梗死患者325例的臨床資料，記錄患者基線資料（包括年齡、性別、既往疾病史）等;同期選取接受健康查體的人群，其中年齡、性別與急性腦梗死組無差異;采用彩色多普勒超聲檢測兩組人群頸動脈內(nèi)膜-中膜測定(Intima-Media Thickness，IMT);
　　2、采用酚-氯仿法抽提兩組人群基因組DNA，采用PCR-限制性酶切片段法分析兩組

9、人群RAGE-374T/A基因多態(tài)性;
　　3、采用雙抗體夾心法檢測兩組血清sRAGE、EN-RAGE水平;
　　結(jié)果：
　　1、急性腦梗死組患者在高脂血癥、糖尿病、IMT、血清CRP、總膽固醇及LDL-c等方面顯著高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義;而在合并高血壓病、吸煙及HDL等方面無差異;急性腦梗死組患者sRAGE及EN-RAGE水平與對照組比較，差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(t=31.16，p=0.000;t=28.04

10、，p=0.003)。
　　2、急性腦梗死組RAGE-374T/A基因多態(tài)性與對照組比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（x2=11.449，p=0.003），其中急性腦梗死組TT頻率高于對照組(26.2％ vs14.3％)，AA頻率低于對照組(23.3％ vs27.6％);而RAGE-374A等位基因頻率顯著低于對照組(48.6％ vs56.7％; x2=4.116，p=0.042)，提示RAGE-374A等位基因?qū)毙阅X梗死可能具有保護(hù)作用

11、。
　　3、急性腦梗死不同亞型間RAGE-374T/A位點基因多態(tài)性及等位基因頻率差異無統(tǒng)計學(xué)意義，提示RAGE-374T/A位點基因多態(tài)性與卒中亞型無關(guān)。
　　4、與未合并糖尿病患者比較，合并糖尿病患者RAGE-374T/A基因亞型及等位基因頻率無顯著差異（x2=3.402，p=0.183; x2=3.366，p=0.067）;
　　5、按照有無合并頸動脈粥樣硬化，我們將急性腦梗死患者分成2個亞組。2亞組RAGE-3

12、74TT、TA及AA基因亞型的分布頻率有顯著統(tǒng)計學(xué)差異（x2=4.13，p=0.005）;合并頸動脈斑塊組AA基因亞型頻率及A等位基因頻率均低于未合并頸動脈斑塊組，但提示A等位基因可能對頸動脈粥樣硬化斑塊形成具有保護(hù)作用。
　　6、我們將急性腦梗死按照有無合并頸動脈粥樣硬化分為2個亞組，比較2亞組相關(guān)因子的血清sRAGE及EN-RAGE水平差異。結(jié)果表明，與未合并頸動脈粥樣硬化組比較，合并頸動脈粥樣硬化的急性腦梗死患者血清sRAG

13、E顯著下降（2.81±0.6 vs3.02±0.74，t=2.59，p=0.047），而EN-RAGE水平顯著升高（33.46±2.25 vs24.51±1.37，t=44.56，p=0.000）。
　　7、我們進(jìn)一步按照有無合并糖尿病對急性腦梗死患者進(jìn)行亞組間sRAGE及EN-RAGE水平比較。結(jié)果表明，與未合并糖尿病足患者比較，急性腦梗死合并糖尿病血清sRAGE及S100A12水平顯著升高(3.01±0.95 vs2.53±0

14、.64,t5.41,p=002;32.58±2.47 vs23.62±3.24,t=25.75,p=0.000)。
　　8、為明確急性腦梗死RAGE-374T/A不同基因亞型對血清sRAGE水平的影響，按照有無合并頸動脈粥樣硬化將急性腦梗死分為2個亞組進(jìn)行比較（表12），結(jié)果表明，合并頸動脈粥樣硬化的-374AA亞型急性腦梗死患者血清sRAGE水平顯著顯著低于TT及TA亞型(2.67±0.82 vs2.98±0.47，t=2.57

15、，p=0.016)，而未合并頸動脈粥樣硬化的-374AA亞型急性腦梗死患者血清sRAGE水平顯著高于TT及TA亞型(3.05.±0.76 vs2.58.±0.62，t=4.18，p=0.000)。
　　9、我們采用logistic回歸分析了急性腦梗死基線資料的相關(guān)因素及RAGE-374T/A基因位點A等位基因與頸動脈粥樣硬化的相關(guān)性（表13）。結(jié)果表明，年齡、糖尿病、CRP水平、血清sRAGE及EN-RAGE水平、RAGE-374

16、A等位基因是頸動脈粥樣硬化的獨立的危險因素。
　　結(jié)論：
　　1.急性腦梗死與對照組RAGE-374 T/A基因多態(tài)性有差異，RAGE-374A等位基因?qū)毙阅X梗死可能具有保護(hù)作用;
　　2.RAGE-374T/A基因多態(tài)性與急性腦梗死病因分型及有無合并糖尿病無相關(guān)性，急性腦梗死合并頸動脈斑塊組患者AA純合子基因型頻率低于未合并頸動脈斑塊組，提示A等位基因可能對頸動脈粥樣硬化具有保護(hù)作用;
　　3.急性腦梗死患者