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1、磁共振成像(MRI)廣泛應(yīng)用于醫(yī)療診斷,已經(jīng)成為研究各種生理活動(dòng)最有效的手段之一。然而,由于生物樣本的背景中存在大量的水質(zhì)子,1H MRI存在對(duì)比度-噪聲比低的缺陷。對(duì)于特定目標(biāo)的成像,19F的高靈敏度(83%相對(duì)于1H),100%自然豐度以及生物體內(nèi)幾乎為零的背景信號(hào),使得19F MRI成為很有前景的方法。根據(jù)Itaru Hamachi等研究,含19F的分子組裝成具有大分子量的聚集體時(shí),其19F NMR波譜信號(hào)因橫向弛豫嚴(yán)重變寬以致消
2、失,并將此機(jī)制用于蛋白質(zhì)和酶的檢測(cè)。
弗林蛋白酶在體內(nèi)平衡,阿爾茨海默氏病,炭疽病,埃博拉發(fā)熱以及癌癥中起著重要作用。許多種癌癥都高表達(dá)弗林蛋白酶,包括非小細(xì)胞肺癌,頭部和頸部的鱗狀細(xì)胞癌等。因此,弗林酶的過(guò)表達(dá)為某些癌癥的早期發(fā)展檢測(cè)提供了依據(jù)。它能夠識(shí)別剪切特定的氨基酸序列Arg-X-Lys/Arg-Arg↓ X,其中Arg是精氨酸,Lys是賴氨酸,X可以是任意氨基酸,↓表示酶切位點(diǎn)。
本課題設(shè)計(jì)了基于肽段Arg
3、-Arg-Val-Arg(RRVR)的氨基酸序列,且含有3,5-雙(三氟甲基)苯甲酸(FMBA)的19F核磁共振探針1,以及其對(duì)照探針1-Scr。探針1能夠被弗林蛋白酶特異性識(shí)別剪切,同時(shí)雙硫鍵被細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽(GSH)還原為巰基,得到的中間體發(fā)生縮合反應(yīng),生成具有親脂性大環(huán)內(nèi)核的二聚體,通過(guò)π-π電子堆積自組裝形成納米粒子,導(dǎo)致19F NMR信號(hào)因橫向弛豫而消失。本文詳細(xì)闡述了探針的合成路線和方法,并使用HPLC進(jìn)行純化分析,高分辨基
4、質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(HR-MALDI-TOF/MS)和1H核磁共振波譜對(duì)合成的化合物進(jìn)行表征。酶切縮合后,采用掃描電子顯微鏡(SEM)、透射電子顯微鏡(TEM)、高分辨質(zhì)譜、紫外可見(jiàn)吸收光譜(UV-Vis)等手段對(duì)生成的納米粒子進(jìn)行了全面的表征。細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)表明,設(shè)計(jì)的探針1能夠進(jìn)入細(xì)胞并自組裝生成納米粒子,導(dǎo)致19F NMR信號(hào)因橫向弛豫而消失,實(shí)現(xiàn)了弗林蛋白酶的活性檢測(cè)。預(yù)計(jì)該19F核磁共振探針今后可以應(yīng)用于腫瘤細(xì)胞的
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