骨骼肌兩型肌纖維體外培養(yǎng)條件的初探.pdf

1、目的:通過(guò)分別對(duì)體外培養(yǎng)條件下的骨骼肌兩型肌纖維細(xì)胞的標(biāo)志蛋白MHC基因同功型的檢測(cè),以探索適合骨骼肌兩型肌纖維細(xì)胞的培養(yǎng)條件,為進(jìn)一步研究?jī)尚图±w維細(xì)胞的區(qū)別及轉(zhuǎn)化機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
　　方法:實(shí)驗(yàn)以18只家兔作為研究對(duì)象,不拘雌雄,4-6周,體重500-1000g,每項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)各用3只。動(dòng)物分四組:Ⅰ型和Ⅱ型骨骼肌組織組,Ⅰ型和Ⅱ型骨骼肌消化細(xì)胞組,Ⅰ型和Ⅱ型骨骼肌細(xì)胞常氧(1、3、7天)型和Ⅰ型和Ⅱ型骨骼肌細(xì)胞低氧(3％O2)培

2、養(yǎng)組。取家兔后肢右側(cè)半膜肌的固有半膜肌亞部和副半膜肌背側(cè)亞部,采用胰蛋白酶一步消化法,用含15%胎牛血清的高糖 DMEM作為細(xì)胞培養(yǎng)液進(jìn)行常氧和低氧培養(yǎng),兩型肌纖維培養(yǎng)細(xì)胞分別在培養(yǎng)1天、3天、7天取材進(jìn)行觀察。最后用常氧及低氧培養(yǎng)3天的兩型骨骼肌細(xì)胞做反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Rt-PCR)鑒定和灰度值測(cè)定作對(duì)照,以分析骨骼肌兩型肌纖維細(xì)胞mRNA標(biāo)志蛋白MHC的表達(dá)變化。
　　結(jié)果:1.骨骼肌組織檢測(cè)結(jié)果:固有半膜肌表達(dá) MHCⅠ

3、及少量的 MHCⅡ型,副半膜肌表達(dá)MHCⅡa, MHCⅡb型。
　　2.消化后未經(jīng)培養(yǎng)的細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果:固有半膜肌細(xì)胞表達(dá) MHCⅠ型、MHCⅡa和MHCⅡb型,副半膜肌表達(dá)MHCⅡa、 MHCⅡb型。
　　3.培養(yǎng)細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果:在常氧培養(yǎng)組固有半膜肌表達(dá) MHCⅡa、 MHCⅡb,不表達(dá)MHCⅠ型;副半膜肌表達(dá) MHCⅡa, MHCⅡb型,不表達(dá) MHCⅠ型。在低氧培養(yǎng)組兩型骨骼肌細(xì)胞均表達(dá)為MHCⅡa, MHCⅡb,不表達(dá)

4、MHCⅠ型。
　　4.我們選取骨骼肌組織組、培養(yǎng)后第3天的常氧培養(yǎng)組和低氧培養(yǎng)組進(jìn)行單因素方差分析統(tǒng)計(jì),結(jié)果顯示:Ⅰ型肌纖維細(xì)胞在常氧及低氧條件的 MHCⅠ型基因表達(dá)與組織相比較存在明顯差異(P<0.05),而 MHCⅡa、MHCⅡb和 MHCⅡx型基因表達(dá)無(wú)明顯差異(P>0.05)。低氧組與常氧組相比, MHCⅠ、MHCⅡa較高,而 MHCⅡb較低。Ⅱ型肌纖維細(xì)胞在常氧及低氧條件的基因MHCⅠ、MHCⅡa、MHCⅡb和MHCⅡx