人骨骼肌成肌細胞的分離培養(yǎng).pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩51頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、由于心肌細胞是終末分化細胞,不能再生,而且心臟內(nèi)沒有心肌干細胞,因此心肌細胞損傷后只能通過瘢痕組織來修復(fù),大量有收縮功能的細胞流失必然造成心室重構(gòu)和心功能降低,最后導(dǎo)致患者終末期心力衰竭(chronicheartfailure,CHF),死亡。目前治療心衰的方法很多,包括藥物、PTCA支架置入術(shù)和冠狀動脈旁路移植術(shù)(CABG)、心臟移植及基因治療等,可通過降低心肌耗氧量、增加心肌血供、增強心肌收縮力及減輕心室重構(gòu)等方法一定程度上延長患者

2、生存期,但均不能從根本上解決心肌丟失的問題,不能逆轉(zhuǎn)心室重構(gòu),使治療效果受到限制。近年來,利用細胞移植的方法重塑壞死區(qū)的心肌結(jié)構(gòu)受到廣泛的關(guān)注,但由于供體的匱乏和異體移植帶來的排斥反應(yīng),使胚胎心肌細胞、胚胎干細胞或成體干/祖細胞受到很大限制。而骨骼肌成肌細胞可自體移植,不受供體來源限制,不需免疫抑制,故備受關(guān)注。本實驗旨在探索高效的人骨骼肌成肌細胞分離培養(yǎng)方法,為臨床應(yīng)用自體成肌細胞移植治療心衰打下良好基礎(chǔ)。 方法:1.采用組織

3、塊反復(fù)貼壁法原代培養(yǎng)人骨骼肌成肌細胞,觀察成肌細胞生長的形態(tài)學(xué)變化;2.利用骨骼肌特異性標記物肌動蛋白(Actin)及結(jié)蛋白(desmin)對培養(yǎng)細胞進行免疫組化鑒定;3.將原代培養(yǎng)的成肌細胞多次傳代,同時對原代及傳代培養(yǎng)的成肌細胞計數(shù),繪制其生長曲線,觀察成肌細胞增殖分化特性;4.探索成肌細胞凍存及復(fù)蘇的方法。 結(jié)果:1.形態(tài)學(xué)觀察:采用組織塊貼壁培養(yǎng)法,肌組織塊接種于培養(yǎng)瓶5天后可見長梭形、紡錘形單核成肌細胞緩慢向組織塊外生

4、長,第6天后單核雙極性成肌細胞向組織塊外大量擴展呈鋪開狀放射樣分布,生長迅速,遠離組織塊區(qū)域的成肌細胞可呈典型的克隆樣生長和簇狀分布,表現(xiàn)出很強的分裂增殖生長特性。8-10天后,大量增殖的成肌細胞相互融合,形成核位于中央的多核性長管狀初生肌管。因此上述原代培養(yǎng)的肌細胞成肌過程大致分為緩慢生長期、分裂增殖期及肌管形成期3個不同的生長增殖分化期,時間分別為培養(yǎng)的第1-5天、6-8天、8-10天。在保持適宜的細胞密度和細胞培養(yǎng)條件下,組織塊至

5、少可以反復(fù)貼壁12次,而細胞形態(tài)保持不變。2.免疫組織化學(xué)鑒定:骨骼肌特異性標記物肌動蛋白(Actin)和結(jié)蛋白(desmin)免疫組化鑒定為陽性,證實了培養(yǎng)細胞的骨骼肌來源。3.骨骼肌成肌細胞增殖分化特性:采用組織塊反復(fù)貼壁培養(yǎng)法,肌組織塊貼壁后5天即開始有細胞從組織塊邊緣爬出,6-8天時生長旺盛,10天時長滿瓶底,可達1.6×104/cm2;原代培養(yǎng)細胞共貼壁12次,隨著貼壁次數(shù)增多,細胞爬出的速度增快,約在第10次時最快,3天即可

6、見有細胞爬出。原代培養(yǎng)的細胞至少可以傳代20次以上,在第10-15代時細胞增殖最為迅速,細胞倍增時間為24小時。4.凍存與復(fù)蘇:成肌細胞凍存、復(fù)蘇后生長良好,仍可保持原有形態(tài)及增殖分化特性。 結(jié)論:與酶消化法相比,組織塊貼壁法簡便、可行,耗材少,時間短、成本低。該方法實用性強,可在短時間內(nèi)得到大量的高純度的成肌細胞,是原代培養(yǎng)人骨骼肌成肌細胞的較好方法。同時,可通過適當?shù)膬龃婕皬?fù)蘇方法使培養(yǎng)細胞得以長時間保存,為適時臨床細胞移植

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論