洋蔥假單胞菌G-63產(chǎn)脂肪酶發(fā)酵條件優(yōu)化及分離純化工藝研究.pdf

1、洋蔥假單胞菌脂肪酶是重要的工業(yè)酶制劑之一，可以催化脂解、酯交換、酯合成等反應(yīng)，廣泛應(yīng)用于生物能源（生物柴油合成）、油脂加工、醫(yī)藥等行業(yè)，但目前國內(nèi)尚無相關(guān)產(chǎn)品。本文在已擁有的高產(chǎn)脂肪酶洋蔥假單胞菌的基礎(chǔ)上，對(duì)其產(chǎn)酶條件及脂肪酶分離純化工藝進(jìn)行了優(yōu)化研究。主要結(jié)果如下：
　　 ⑴采用單因子實(shí)驗(yàn)篩選出產(chǎn)酶的最適碳源和氮源，然后結(jié)合Plackett-Burman設(shè)計(jì)和響應(yīng)面(RSM)法對(duì)洋蔥假單胞菌產(chǎn)脂肪酶條件進(jìn)行系統(tǒng)優(yōu)化。單因子試驗(yàn)

2、確定洋蔥假單胞菌G-63產(chǎn)脂肪酶的最適碳源、氮源分別為：麥芽糖和豆餅水解液，其最佳裝液量為30mL/250mL三角瓶。
　　 ⑵通過Plackett-Burman設(shè)計(jì)，對(duì)影響其產(chǎn)酶的11個(gè)相關(guān)因素進(jìn)行了評(píng)估，篩選出具有顯著效應(yīng)的三個(gè)因子：橄欖油乳化液濃度、豆餅水解液濃度及初始pH值。然后擬合這三個(gè)主效因子關(guān)于發(fā)酵液酶活力的一階線性模型，再沿著一階模型指定的路徑進(jìn)行最陡爬坡試驗(yàn)，逼近以上三個(gè)因子的最大響應(yīng)區(qū)后，采用響應(yīng)面分析法，確

3、定出橄欖油乳化液、豆粉水解液的最佳濃度和最佳初始pH值分別為4.34%，1.96%和8.4。優(yōu)化后液體發(fā)酵培養(yǎng)基中脂肪酶活力提高到44.39U/mL，比未優(yōu)化的初始酶活13.45 U/mL提高了3.3倍。在優(yōu)化條件的基礎(chǔ)上，選用不同的油脂作誘導(dǎo)劑，考察了油脂對(duì)發(fā)酵的影響，結(jié)果表明，可以使用豆油或豬油替代橄欖油作為脂肪酶誘導(dǎo)劑，可進(jìn)一步降低脂肪酶生產(chǎn)成本。
　　 ⑶采用PEG/磷酸鹽雙水相體系工藝從洋蔥假單胞菌G-63發(fā)酵粗酶液中