DM大鼠甲狀腺組織超微結(jié)構(gòu)和功能相關(guān)因子mRNA表達(dá)的變化及干預(yù)研究.pdf

1、目的:糖尿病(diabetes mellitus,DM)是一種由多因素引起的以慢性高血糖為特征的全身性代謝疾病,同時(shí)存在著胰島素以外的多種內(nèi)分泌異常。近年流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)2型糖尿病患者甲狀腺形態(tài)及功能異常發(fā)生率比正常人群高。終末糖基化產(chǎn)物(AGEs)-終末糖基化產(chǎn)物受體(RAGE)系統(tǒng)與慢性高血糖引起的多種并發(fā)癥密切相關(guān),但其與DM中甲狀腺組織損傷的關(guān)系研究較少。氨基胍(amino guanidine,AG)和胰島素(insulin,I

2、NS)可以通過(guò)不同的途徑阻斷AGEs-RAGE系統(tǒng)的作用。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察不同時(shí)期DM大鼠未干預(yù)組(DM)、DM大鼠AG干預(yù)組(DA)、DM大鼠胰島素干預(yù)組(DI)及對(duì)照組(N)的甲狀腺超微結(jié)構(gòu)改變,檢測(cè)甲狀腺組織中糖毒性相關(guān)因子RAGEmRNA,以及甲狀腺重要功能相關(guān)因子TSHR、NIS、TG、TPOmRNA的表達(dá)情況,探討DM大鼠甲狀腺組織結(jié)構(gòu)和功能變化以及AG、INS的干預(yù)作用。
　　 方法:成年雄性wistar大鼠(210

3、-255g)112只,隨機(jī)分為兩組:N組(25只)和T2DM實(shí)驗(yàn)組(87只)。N組給予普通飼料喂養(yǎng),T2DM實(shí)驗(yàn)組給予高脂飼料喂養(yǎng)8周后以30mg/kg鏈脲佐菌鼠尾靜脈注射造模。N組鼠尾靜脈注射同等劑量檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液。72小時(shí)后實(shí)驗(yàn)組大鼠血糖均大于16.65mmol/L,造模成功。成模后將實(shí)驗(yàn)組大鼠隨機(jī)分為DM組27只,DA組28只,DI組32只。DA組以50mg/kg.d的AG灌胃。DI組以6U/kg.d皮下注射精蛋白鋅胰島素

4、。分別于成模后12周和20周處死各組大鼠,留取甲狀腺組織①2.5％戊二醛1％鋨酸溶液進(jìn)行雙重固定,以JEM100CXⅡ透射電鏡攝片,觀察甲狀腺組織的超微病理結(jié)構(gòu)。②液氮固定后采用半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(RT-PCR)檢測(cè)甲狀腺組織中RAGE、TSHR、NIS、TG、TPOmRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果:①實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),DM組體重低于DA、DI、N三組(p<0.01),后三組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。DM、DA、DI三組血糖均高于N組(

5、p<0.01),DM組和DA組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,二者均高于DI組(p<0.01)。②超微結(jié)構(gòu):DM組大鼠甲狀腺組織表現(xiàn)為濾泡上皮細(xì)胞損傷。血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷,基底膜增厚,炎細(xì)胞浸潤(rùn),纖維增生,損傷程度隨病程延長(zhǎng)而加重；DA組和DI組甲狀腺組織超微結(jié)構(gòu)較DM組有所改善:且DI組治療效果好于DA組。③RT-PCR檢測(cè)mRNA相對(duì)表達(dá)量:RAGE:DM組高于DI組、DA組、N組(p<0.01)；DA組低于DI組(12周P<0.05,20周P<0.0

6、1),與N組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；DI組高于N組(p<0.01)。TSHR:12周:DM組高于DA組(p<0.01)、DI組(p<0.01)、N組(p<0.05);DA組低于DI組(p=0.894),高于N組(p=0.239);DI組高于N組(p=0.197)。NIS:DM組低于DA組(12周P<0.01,20周p=0.075)、DI組(12周P<0.01,20周P=0.969)、N組(12及20周P<0.01)；DA組低于DI組(12周及20

7、周p=1.000)、N組(12周P=1.000,20周P=0.002)；DI組低于N組(12周P=1.000,20周P=0.155)。TG:20周:DM組低于DA組、DI組、N組(均P<0.01)；DA組高于DI組(p=0.751),低于N組(p=0.675),DI組低于N組(P=0.426)。TPO:DM組低于DA組(12周P<0.01,20周P=0.505)、DI組(p<0.01)、N組(p<0.01)；DA組低于DI組、N組(p<

8、0.01)；DI組低于N組(p<0.01)。
　　 結(jié)論:①短期高脂飼料喂養(yǎng)配合一次尾靜脈注射小劑量STZ可以成功制備T2DM大鼠模型。②DM組甲狀腺超微結(jié)構(gòu)損傷,顯示功能低下。RAGEmRNA、TSHRmRNA表達(dá)增高,NISmRNA、TPOmRNA、TGmRNA表達(dá)均有所降低。提示RAGE表達(dá)增加可能與甲狀腺受損有關(guān)。③DA組與DM組比較,甲狀腺組織超微結(jié)構(gòu)損傷減輕,甲狀腺功能相關(guān)因子mRNA表達(dá)改善,RAGEmRNA表達(dá)減

9、少,提示AG可以減少RAGE表達(dá),減輕糖毒性導(dǎo)致的甲狀腺組織損傷。④DI組與DM組比較,血糖明顯降低,甲狀腺組織超微結(jié)構(gòu)受損減輕,功能相關(guān)因子mRNA表達(dá)改善,RAGEmRNA表達(dá)減少,提示補(bǔ)充胰島素可以降低血糖,減少RAGE表達(dá)和活化,對(duì)糖毒性導(dǎo)致的甲狀腺損傷具有保護(hù)作用。⑤DI組治療效果較DA組好,而DI組RAGEmRNA表達(dá)較DA組高,顯示胰島素可能除存在抑制RAGEmRNA表達(dá)機(jī)制以外,還存在其他機(jī)制對(duì)糖尿病大鼠甲狀腺產(chǎn)生保護(hù)。