高精度定量毛細管電泳及高精度定量膠束電動毛細管色譜的研究.pdf

1、毛細管電泳由20世紀80年代發(fā)展至今，由于其具有很高的分離效能，溶液和樣品消耗極少，儀器相對簡單等優(yōu)點，已經越來越廣泛地應用于生物技術、藥物研發(fā)、醫(yī)療診斷、環(huán)境保護等各個領域。然而，這一技術還存在一定的局限性，特別是在其進樣方式方面，嚴重限制了它在定量分析等方面的發(fā)展。本論文主要是對高精度定量毛細管電泳系統(tǒng)和高精度定量膠束電動毛細管色譜系統(tǒng)進行研究，研制了高精度定量毛細管電泳系統(tǒng)，確定了最佳的硬件條件，并首次利用這一系統(tǒng)分析實際樣品，得

2、到了理想的結果。另外，首次構建了高精度定量膠束電動毛細管色譜系統(tǒng)，使得定量系統(tǒng)應用更為廣泛有效，同時進行了方法學考察和實際樣品的分析。使這兩種電動分析技術的準確度和精密度得到極大的提高，從而為其進入質控和質保領域奠定了基礎。 全文由四章組成。主要內容包括： 第一章介紹了選題背景和意義。主要介紹了毛細管電泳和膠束電動毛細管色譜。綜述了兩者的發(fā)展以及在實際應用中的重要地位?；仡櫫嗣毠茈娪具M樣技術的發(fā)展，概述了采用閥進樣的毛

3、細管電泳技術的歷史和現狀，歸納總結了常規(guī)毛細管電泳進樣技術存在的問題。 第二章的工作主要是建立高精度定量毛細管電泳系統(tǒng)并且將其優(yōu)化。定量毛細管電泳系統(tǒng)的搭建：將20 nL的四通進樣閥引入毛細管電泳系統(tǒng)，考察了進樣閥在電場中的最佳位置，得出使系統(tǒng)穩(wěn)定運行的組建方式，并將自制的電隔離槽引入定量系統(tǒng)，使進樣閥隔離在電場之外；定量毛細管電泳系統(tǒng)的優(yōu)化：分析各段毛細管的長度對柱效的影響，并且考慮空間設置，得到了最佳的毛細管長度。

4、第三章的內容主要是對于定量毛細管電泳系統(tǒng)的性能測定以及與傳統(tǒng)進樣方法的比較，并將其應用到測定實際樣品中的咖啡因、可可堿和茶堿的研究中。定量毛細管電泳系統(tǒng)的性能測定：以苯甲酸和DMSO的遷移時間和峰面積的RSD值作為指標，考察了定量閥進樣、電遷移進樣和重力進樣的定量精度，用定量毛細管電泳系統(tǒng)分析測得的DMSO峰面積的RSD值為1.46％，明顯優(yōu)于兩種傳統(tǒng)進樣方法，其中，重力進樣法測得DMSO峰面積的RSD值為2.55％，而用電遷移進樣則為

5、1.76％。并且利用這一系統(tǒng)連續(xù)進樣，在不切斷電場的條件下，得到更好的定量精度，DMSO遷移時間的RSD值為0.67％，其峰面積的RSD值為1.26％?？Х纫?、茶堿、可可堿三種生物堿的色譜條件的建立：通過對緩沖液種類、緩沖液濃度、緩沖液pH值以及電泳電壓的考察，最終確定的色譜條件為：15 mM，pH 9.2的硼砂緩沖液作為背景緩沖液，工作電壓為20 kV。在此條件下三種生物堿分離效果最佳，在此基礎上，對于茶葉、咖啡、可樂等實際樣品中的三

6、種生物堿進行檢測，得到理想的效果。 第四章的工作中，首次建立了高精度定量膠束電動毛細管色譜系統(tǒng)，對其性能進行了測定并與傳統(tǒng)進樣方法進行了比較，然后利用該系統(tǒng)對頭孢他啶、頭孢呋辛鈉、頭孢拉定和頭孢曲松鈉進行分析檢測。定量膠束電動毛細管色譜系統(tǒng)的性能測定：考察了電滲流以及膠束濃度對柱效的影響，并以苯甲酸、苯、甲苯和DMSO的遷移時間和峰面積的RSD值作為指標，考察了定量閥進樣、電遷移進樣和重力進樣的定量精度，得到定量閥進樣定量精度遠

7、遠優(yōu)于傳統(tǒng)進樣方法，以DMSO為例，用定量進樣法進行進樣分析，其峰面積的RSD為1.89％，低于用重力進樣得到的5.48％以及用電遷移進樣得到的2.32％。頭孢類藥物的色譜條件的建立：通過對緩沖液種類、SDS濃度、緩沖液濃度、緩沖液pH值以及電泳電壓的考察，最終確定的色譜條件為：10 mM的硼砂、20 mMSDS（pH8.5）作為背景緩沖液，工作電壓為18 kV。在此條件下四種頭孢類藥物分離效果最佳，在此基礎上，對四種頭孢類藥物的注射制