尼莫地平對H-,2-O-,2-誘導動脈血管平滑肌損傷的保護作用.pdf

1、目的：在離體豬腦基底動脈和人臍動脈平滑肌細胞水平上，觀察尼莫地平對抗H202誘導氧化應激損傷和抗細胞凋亡的保護作用。為臨床應用尼莫地平提供新的實驗依據(jù)。 方法：(1)采用去內皮離體血管環(huán)灌流的方法，建立H2O2損傷模型。隨機分為正常(未處理)組、H2O2(2×10-4 mol·L-1)損傷組、維生素C(104mol·L-1)預處理組、尼莫地平高、中、低劑量(5×10-6 mol·L-1，5×10-7mol·L-1，5×10-8

2、mol·L-1)預處理組血管，比較各組血管環(huán)對KCl、苯腎上腺素和H2O2收縮的影響；檢測各組血管組織勻漿中的SOD(超氧化物歧化酶)、CAT(過氧化氫酶)、GStt-PX(谷胱甘肽過氧化物酶)活性及MDA(丙二醛)含量。(2)培養(yǎng)人臍動脈平滑肌細胞，觀察尼莫地平(10-7～10-10 mol·L-1)、維生素C(10-4 mol·L-1)對抗H2O2(10-4 mol·L-1)誘導細胞凋亡的情況。用MTT比色法檢測細胞活力；流式細胞儀

3、及Hoechst染色檢測細胞凋亡情況；采用免疫組化染色方法檢測血管平滑肌細胞Caspase-3的表達。 結果：(1)a.H2O2損傷組與正常組比較，血管環(huán)對KCl、苯腎上腺素和H2O2的收縮反應明顯增加(P<0.05)；維生素C不能緩解H2O2損傷后血管對KCl、苯腎上腺素的收縮反應增強現(xiàn)象，只能緩解對H2O2的收縮反應；尼莫地平高、中、低劑量呈劑量依賴性抑制KCI、苯腎上腺素和H2O2對血管環(huán)的收縮反應(P<0.01)。b.H

4、2O2損傷組MDA含量升高， SOD、CAT、GSH-PX活性降低，與正常組比較，有顯著性差異(P<0.05)。尼莫地平高、中、低劑量和維生素C均能降低組織中MDA含量，升高SOD、CAT、GStt-PX的活性，與H2O2損傷組比較，差異顯著(P<0.05)。(2)H2O2損傷組使人臍動脈平滑肌細胞活力降低；細胞凋亡率有所增加，熒光染色顯示典型的凋亡小體，表現(xiàn)為核固縮、碎裂；Caspase-3表達增加(P<0.05)。不同劑量尼莫地平均

5、能顯著提高平滑肌細胞活力(P<0.05)，其中10-9mol·L-1濃度的尼莫地平組較其他濃度組更有統(tǒng)計學意義；該濃度也能減少細胞凋亡率，熒光染色顯示凋亡小體減少，降低Caspase-3的表達(P<0.05)，與維生素C組比較沒有統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 結論：鈣通道阻斷劑尼莫地平具有抗氧化應激作用，同時也可對抗H2O2誘導人臍動脈平滑肌細胞的凋亡，比維生素C更能預防H2O2對腦基底動脈血管的氧化損傷；其機制可能與降低Cas