漏蘆對H2O2誘導的HepG-2細胞損傷的保護作用.pdf

1、目的：從細胞水平研究祁州漏蘆水提物（RUWE）對H2O2誘導人HepG-2細胞損傷的保護作用及其機制，從而得出漏蘆對人肝損傷的保護作用。
　　方法：1、建立H2O2誘導HepG-2細胞損傷模型，用不同濃度H2O2在同一時間和同一濃度H2O2不同時間處理HepG-2細胞，采用四甲基偶氮唑鹽比色（MTT）測定H2O2對細胞增值抑制作用，試劑盒檢測細胞培養(yǎng)液上清中乳酸脫氫酶（LDH）、谷丙轉氨酶（ALT）和谷草轉氨酶（AST）的活性，得

2、到最佳H2O2誘導HepG-2細胞損傷濃度。2、MTT法檢測RUWE對HepG-2細胞毒理作用，得到漏蘆對HepG-2細胞無毒作用濃度；將HepG-2細胞分成對照組、模型組、RUWE低、中、高劑量組，HepG-2細胞貼壁后，RUWE按50、100、200 mg/L劑量預處理24h后，模型組和RUWE組用H2O2誘導損傷，對照組補充等體積培養(yǎng)液，采用試劑盒測定培養(yǎng)液上清中LDH、ALT和AST的活性，細胞胞漿中超氧化物歧化酶（SOD）的活

3、性和谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）的含量，得到 RUWE的最佳保護濃度。3、以最佳保護濃度作為研究對象，利用免疫印記法（Western blot）檢測細胞中細胞外信號調節(jié)蛋白激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）、P38絲裂原活化蛋白激酶（P38）及其磷酸化形式蛋白的表達。
　　結果：1、H2O2對HepG-2細胞的損傷作用隨劑量的增加和時間的增長而增強，在H2O2濃度為300μmol/L，作用時間2h時對HepG

4、-2細胞的抑制率為45.78±2.11％，培養(yǎng)液上清中LDH、ALT和AST水平較正常組明顯升高（P<0.01），繼續(xù)升高濃度和延長時間仍能使損傷加強，但幅度趨于平緩。2、不同濃度RUWE預處理后，與模型組相比，RUWE能顯著提高細胞生存率；降低HepG-2細胞培養(yǎng)液上清中LDH、ALT和AST水平（P<0.01），且呈劑量依賴；降低細胞內MDA水平（P<0.01），同時增高細胞內SOD的活性和GSH的含量（P<0.01），劑量效果不明

5、顯。3、Western結果顯示，H2O2能顯著升高HepG-2細胞ERK、JNK、P38及其磷酸化蛋白的表達，與模型組相比，RUWE組中的ERK、JNK蛋白表達均降低，P-ERK、P-JNK蛋白表達顯著降低（P<0.01），P38和P-P38蛋白表達無明顯變化。
　　結論： RUWE對H2O2所致HepG-2細胞損傷具有明顯的保護作用，能顯著抑制H2O2對HepG-2細胞的損傷作用。其作用可能與其增高抗氧化能力，抑制ERK、JNK