漏蘆對(duì)H2O2誘導(dǎo)的HepG-2細(xì)胞損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的：從細(xì)胞水平研究祁州漏蘆水提物（RUWE）對(duì)H2O2誘導(dǎo)人HepG-2細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制，從而得出漏蘆對(duì)人肝損傷的保護(hù)作用。
　　方法：1、建立H2O2誘導(dǎo)HepG-2細(xì)胞損傷模型，用不同濃度H2O2在同一時(shí)間和同一濃度H2O2不同時(shí)間處理HepG-2細(xì)胞，采用四甲基偶氮唑鹽比色（MTT）測(cè)定H2O2對(duì)細(xì)胞增值抑制作用，試劑盒檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液上清中乳酸脫氫酶（LDH）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）的活性，得

2、到最佳H2O2誘導(dǎo)HepG-2細(xì)胞損傷濃度。2、MTT法檢測(cè)RUWE對(duì)HepG-2細(xì)胞毒理作用，得到漏蘆對(duì)HepG-2細(xì)胞無毒作用濃度；將HepG-2細(xì)胞分成對(duì)照組、模型組、RUWE低、中、高劑量組，HepG-2細(xì)胞貼壁后，RUWE按50、100、200 mg/L劑量預(yù)處理24h后，模型組和RUWE組用H2O2誘導(dǎo)損傷，對(duì)照組補(bǔ)充等體積培養(yǎng)液，采用試劑盒測(cè)定培養(yǎng)液上清中LDH、ALT和AST的活性，細(xì)胞胞漿中超氧化物歧化酶（SOD）的活

3、性和谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）的含量，得到 RUWE的最佳保護(hù)濃度。3、以最佳保護(hù)濃度作為研究對(duì)象，利用免疫印記法（Western blot）檢測(cè)細(xì)胞中細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）、P38絲裂原活化蛋白激酶（P38）及其磷酸化形式蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：1、H2O2對(duì)HepG-2細(xì)胞的損傷作用隨劑量的增加和時(shí)間的增長(zhǎng)而增強(qiáng)，在H2O2濃度為300μmol/L，作用時(shí)間2h時(shí)對(duì)HepG

4、-2細(xì)胞的抑制率為45.78±2.11％，培養(yǎng)液上清中LDH、ALT和AST水平較正常組明顯升高（P<0.01），繼續(xù)升高濃度和延長(zhǎng)時(shí)間仍能使損傷加強(qiáng)，但幅度趨于平緩。2、不同濃度RUWE預(yù)處理后，與模型組相比，RUWE能顯著提高細(xì)胞生存率；降低HepG-2細(xì)胞培養(yǎng)液上清中LDH、ALT和AST水平（P<0.01），且呈劑量依賴；降低細(xì)胞內(nèi)MDA水平（P<0.01），同時(shí)增高細(xì)胞內(nèi)SOD的活性和GSH的含量（P<0.01），劑量效果不明

5、顯。3、Western結(jié)果顯示，H2O2能顯著升高HepG-2細(xì)胞ERK、JNK、P38及其磷酸化蛋白的表達(dá)，與模型組相比，RUWE組中的ERK、JNK蛋白表達(dá)均降低，P-ERK、P-JNK蛋白表達(dá)顯著降低（P<0.01），P38和P-P38蛋白表達(dá)無明顯變化。
　　結(jié)論： RUWE對(duì)H2O2所致HepG-2細(xì)胞損傷具有明顯的保護(hù)作用，能顯著抑制H2O2對(duì)HepG-2細(xì)胞的損傷作用。其作用可能與其增高抗氧化能力，抑制ERK、JNK