Akt通路在SDF-1α-CXCR4軸調(diào)控胃癌細(xì)胞表達(dá)CD133中的作用.pdf

1、研究背景和目的：
　　胃癌的侵潤(rùn)和轉(zhuǎn)移是胃癌致死和復(fù)發(fā)率居高不下的關(guān)鍵因素，近期研究發(fā)現(xiàn)，胃癌中腫瘤起始細(xì)胞標(biāo)志物 CD133的表達(dá)與胃癌的侵潤(rùn)轉(zhuǎn)移相關(guān)，在血液中檢測(cè)CD133的表達(dá)可預(yù)測(cè)腫瘤復(fù)發(fā)。SDF-1α/CXCR4軸對(duì)多種腫瘤有調(diào)控作用，其對(duì)胃癌也有上調(diào)多種基因的表達(dá)。
　　我們前期研究表明，胃癌標(biāo)本中，CXCR4和CD133表達(dá)有相關(guān)性，且兩者都與與腫瘤的侵潤(rùn)深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率呈正相關(guān)。提示 SDF-1α/CXCR

2、4軸對(duì)胃癌中CD133表達(dá)有調(diào)控作用，但是具體分子生物學(xué)機(jī)制未有報(bào)道，本課題將在前期實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步篩選和探討SDF-1α/CXCR4軸下游和CD133上游間的信號(hào)通路，以期闡明SDF-1α/CXCR4軸對(duì)胃癌CD133表達(dá)分子信號(hào)機(jī)制。
　　研究方法：
　　正常條件下培養(yǎng)人胃癌 KATO-Ⅲ細(xì)胞，免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)胃癌 KATO-III細(xì)胞系中CXCR4、Akt、p-Akt及CD133的表達(dá)。
　　應(yīng)用含 SD

3、F-1α培養(yǎng)液，作用于細(xì)胞，采用半定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）、蛋白免疫印跡法（Western blot）檢測(cè)KATO-Ⅲ中CD133mRNA和蛋白的表達(dá)。
　　篩選出合適濃度的CXCR4特異性抑制劑AMD3100預(yù)處理KATO-Ⅲ細(xì)胞，然后再用SDF-1α刺激已預(yù)處理的細(xì)胞，收集細(xì)胞，采用RT-PCR和Western blot法檢測(cè)CXCR4、CD133的表達(dá)。了解SDF-1α/CXCR4軸對(duì)CD133表達(dá)的影響。

4、r>　　篩選出合適濃度的PI3K特異性抑制劑 LY294002預(yù)處理 KATO-Ⅲ細(xì)胞，然后再用SDF-1α刺激已預(yù)處理的細(xì)胞，收集細(xì)胞，采用RT-PCR和Western blot法檢測(cè)CXCR4、Akt、p-Akt、CD133的表達(dá)。探索SDF-1α/CXCR4軸對(duì)CD133的調(diào)控是否是通過(guò)Akt信號(hào)通路來(lái)實(shí)現(xiàn)的。
　　研究結(jié)果：
　　1.免疫細(xì)胞化學(xué)染色證實(shí)胃癌KATO-Ⅲ細(xì)胞呈CXCR4、Akt、p-Akt及CD133

5、陽(yáng)性表達(dá)。
　　2. SDF-1α激活CXCR4下游PI3K/Akt信號(hào)通路，SDF-1α可誘導(dǎo)Akt磷酸化，即p-Akt增高。但總Akt表達(dá)未見(jiàn)明顯改變，同時(shí)使得CD133表達(dá)增高，但CXCR4無(wú)明顯變化。
　　3. CXCR4特異性抑制劑AMD3100可有效地降低p-Akt水平，表明p-Akt水平上升SDF-1α/CXCR4軸激活引起的，同時(shí)使得CD133表達(dá)下降，據(jù)此可推測(cè)CD133的表達(dá)也是通過(guò)這條信號(hào)通路來(lái)實(shí)現(xiàn)調(diào)節(jié)

6、的。
　　4.以PI3K特異性抑制劑LY294002處理KATO-Ⅲ細(xì)胞后，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，LY294002處理能顯著抑制SDF-1α引起的Akt活化，即p-Akt明顯被抑制。同時(shí)CD133的表達(dá)也降低。據(jù)此推測(cè)CD133的表達(dá)很有可能是通過(guò)SDF-1α/CXCR4-PI3K/Akt-CD133這條信號(hào)通路來(lái)實(shí)現(xiàn)調(diào)節(jié)的。
　　研究結(jié)論：
　　1.胃癌KATO-III細(xì)胞中CXCR4、Akt、p-Akt及CD133免疫細(xì)胞化學(xué)