調(diào)控miR-141，miR-205表達對宮頸癌細胞株生物學特性影響的實驗研究.pdf

1、研究背景：宮頸癌是全世界婦女中第三常見的惡性腫瘤。高危型HPV(Human Papillomavirus，人乳頭瘤病毒)的持續(xù)感染是導(dǎo)致宮頸癌及癌前病變的最重要原因。但僅有一部分高危型HPV感染者會發(fā)生宮頸癌或癌前病變，說明高危型HPV感染不是唯一的病因，其它未知因素如基因水平的改變似乎也在疾病發(fā)生發(fā)展中起作用。 microRNAs(miRNAs)是一類可調(diào)控基因表達的內(nèi)源性非編碼小分子RNA，通過與靶基因mRNA特異的堿基配對

2、結(jié)合，引起靶基因mRNA降解或者翻譯抑制，產(chǎn)生轉(zhuǎn)錄后的靶基因沉默。研究表明，miRNAs通過調(diào)控腫瘤相關(guān)基因的表達，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，而具體機制仍需進一步探討。 本課題組的先期研究利用microRNAs芯片，篩選出HPV陽性的宮頸腺癌、鱗癌組織與相應(yīng)的癌旁組織呈差異表達的microRNAs，發(fā)現(xiàn)microRNA—205(miR—205)在HPV陽性的宮頸腺癌組織中表達下降，microRNA-141(miR-141)

3、在HPV陽性宮頸鱗癌組織中表達升高。但兩種miRNAs在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的功能尚不清楚。 目的：1、在宮頸鱗癌細胞系中下調(diào)miR-141表達，在宮頸腺癌細胞系中上調(diào)miR—205表達。2、分別觀察調(diào)控miRNAs表達后，宮頸癌細胞生物學特性的變化。 方法：1、在宮頸鱗癌細胞系SiHa細胞中同法轉(zhuǎn)染miR-141的抑制分子(anti—miR-141)和陰性對照，在宮頸腺癌細胞系HeLa細胞中脂質(zhì)體法瞬時轉(zhuǎn)染miR—205前

4、體分子(miR—205 precursor)和陰性對照，熒光顯微鏡下觀察陰性對照組轉(zhuǎn)染情況。2、RealtimePCR法分別檢測轉(zhuǎn)染后SiHa細胞中miR-141表達和HeLa細胞中miR—205表達。3、轉(zhuǎn)染后MTT法檢測細胞生長。4、平板克隆形成實驗檢測細胞增殖。5、Transwell小室法檢測轉(zhuǎn)染后細胞遷移能力。6、流式細胞儀檢測轉(zhuǎn)染后細胞凋亡率。7、流式細胞儀檢測轉(zhuǎn)染后細胞周期分布。 結(jié)果： 1、SiHa細胞轉(zhuǎn)染

5、anti—miR-141后，miR-141表達下降為0.68倍。細胞克隆形成率及轉(zhuǎn)染后24、48、72小時各組活細胞數(shù)與陰性對照組比較無差異。實驗組G0/G1期細胞比例較陰性對照組降低(72.44％±2.17％，79.75％±3.23％)，G2/M期細胞比例升高(11.41％±1.36％，6.43％±1.18％)，兩組細胞的凋亡率、細胞遷移能力無明顯差異。 2、HeLa細胞轉(zhuǎn)染miR—205 precursor后，miR—205

6、表達增高3061.5倍。細胞克隆形成率增加，為陰性對照組的1.25倍。但轉(zhuǎn)染后24、48、72小時，各組間活細胞數(shù)無差異。實驗組S期細胞比例較對陰性照組降低(19.17％±2.00％，23.38％±1.56％)，G0/G1期比例升高(64.38％±2.14％，58.63％±2.71％)，而細胞凋亡率、細胞遷移能力無明顯改變。 結(jié)論：1、成功地在宮頸癌細胞株中調(diào)控miRNAs的表達。2、在宮頸鱗癌中下調(diào)miR-141表達后，細胞周