miR-21在宮頸鱗癌中表達與其生物學特性的研究.pdf

1、目的：
　　宮頸癌是女性常見的生殖道惡性腫瘤之一,其發(fā)病率居女性惡性腫瘤第二位,復發(fā)合并轉移的晚期宮頸癌患者的治療一直是臨床難題,預后差,嚴重威脅婦女健康。本研究通過實時熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測miR-21在宮頸上皮內瘤變組織和宮頸鱗癌組織中的表達,觀察miR-21在宮頸鱗狀上皮惡變過程的不同階段的表達情況,分析其與宮頸鱗癌患者的HPV類型、臨床病理資料之間的關系;通過下調宮頸鱗癌SiHa細胞中miR-21的表達,研究

2、miR-21對宮頸鱗癌SiHa細胞的生長、增殖、凋亡、細胞周期及遷移能力的影響,為宮頸鱗癌的發(fā)病機制研究提供新思路,為尋找宮頸鱗癌新的治療靶點及靶向基因治療提供基礎實驗依據。
　　方法：
　　第一部分:收集2010年4月至2012年4月廣東省婦幼保健院婦科經手術后病理確診為宮頸鱗狀細胞癌60例、中重度宮頸上皮內瘤變(CINII-III)30例和正常宮頸組(同期因其它良性腫瘤行全子宮切除術的患者)30例,分別切取相對應的宮頸石

3、蠟組織,采用qRT-PCR方法檢測miR-21的表達,進一步分析其與宮頸鱗癌患者HPV類型及臨床病理資料之間的關系。
　　第二部分:通過瞬時轉染miR-21抑制劑,下調宮頸鱗癌SiHa細胞miR-21的表達,經qRT-PCR、四甲基偶氮唑藍(MTT)法、流式細胞術、平板克隆和Transwell小室法,探討miR-21對SiHa細胞生物學特性(細胞生長、增殖、凋亡、周期及遷移)的影響。
　　結果：
　　1.本研究發(fā)現,相

4、對于正常宮頸組織,miR-21在CINII-III、SCC組織中的表達明顯上升,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);SCC組與CINII-III組相比,miR-21表達水平也升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　2.miR-21的表達在HPV16型陽性宮頸鱗癌組織中明顯上調(P<0.05);結合臨床病理資料,相對于無淋巴結轉移的宮頸鱗癌組織,miR-21在有淋巴結轉移的宮頸鱗癌組織中的表達上升1.61倍(P<0.05),而m

5、iR-21的表達與宮頸鱗癌患者是否先期放化療、分化程度、宮頸間質浸潤深度、是否脈管浸潤和有無宮旁浸潤的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　3.體外實驗證明,相對于陰性對照組,轉染miR-21ASO(miR-21抑制劑)后,qRT-PCR結果顯示,miR-21在SiHa細胞中的表達下調60％,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。陰性對照組與空白對照組相比,miR-21的相對表達量差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　4.M

6、TT結果顯示,miR-21ASO組與陰性對照組相比,SiHa細胞的存活率明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);尤其在轉染后48h生長抑制最為明顯,細胞存活率分別為(91.92±8.19)%、(36.76±11.18)%。而陰性對照組與空白對照組細胞存活率差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　5.miR-21ASO組與陰性對照組的細胞克隆形成率分別為(83.00士2.60)%、(50.70士4.50)%,差異有統(tǒng)計學意義(P

7、<0.05)。
　　6.轉染miR-21抑制劑48小時后,經流式細胞儀檢測結果顯示,miR-21ASO組凋亡率較陰性對照組升高(P<0.05),但細胞各周期分布比例的差別無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。
　　7.在200倍鏡視野下,miR-21ASO組與陰性對照組SiHa細胞的遷移細胞數分別為30.87±6.77、54.00±3.65,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);而空白對照組與陰性對照組的遷移穿膜細胞數差異無統(tǒng)計學意義(

8、P>0.05)。
　　結論：
　　1.miR-21在正常宮頸組、CINII-III及SCC組織中的表達逐漸升高,并且在HPV16型陽性的宮頸鱗癌和有淋巴結轉移的宮頸鱗癌組織中過表達。說明miR-21可能參與了宮頸鱗狀上皮惡變轉化過程,其作用機制可能為miR-21與HPV16型相互作用有關。
　　2.下調miR-21的表達,可抑制宮頸鱗癌細胞的生長、增殖和遷移能力,促進凋亡,但細胞周期無明顯改變,表明miR-21可能在宮