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文檔簡(jiǎn)介
1、1目的
1.1研究?jī)和z質(zhì)瘤中miR-92b、miR-222的表達(dá)及對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、凋亡的影響。
1.2利用RNA干擾敲除miR-92b和miR-222靶基因,研究miR-92b、miR-222通過何種信號(hào)通路調(diào)控膠質(zhì)瘤細(xì)胞的活性。
1.3構(gòu)建小鼠皮下荷瘤模型,應(yīng)用RNA干擾敲除膠質(zhì)瘤中miR-222的表達(dá),探討RNA干擾抑制膠質(zhì)瘤生長(zhǎng)的療效,并探索其機(jī)制。
2方法
2.1分析膠質(zhì)瘤m
2、icroRNA芯片表達(dá)譜數(shù)據(jù),篩選有研究?jī)r(jià)值的microRNA.并利用realtimePCR驗(yàn)證芯片結(jié)果。通過脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染人工合成microRNA(mimics)及其抑制劑(inhibitor),調(diào)節(jié)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中miR-92b和miR-222的表達(dá),分析其對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、克隆形成、凋亡的影響。
2.2生物信息學(xué)分析預(yù)測(cè)miR-92b和miR-222的靶基因,并利用雙熒光素酶報(bào)告、Westernblot驗(yàn)證靶基因。利用RNA
3、干擾技術(shù)驗(yàn)證miR-92b和miR-222通過何種信號(hào)通路調(diào)控膠質(zhì)瘤細(xì)胞活性。
2.3、構(gòu)建小鼠皮下荷瘤模型,利用RNA干擾抑制miR-222表達(dá),觀察腫瘤生長(zhǎng)速度、體積變化,進(jìn)一步驗(yàn)證敲低miR-222對(duì)膠質(zhì)瘤的抑制作用。
3結(jié)果
3.1miR-92b、miR-222在兒童膠質(zhì)瘤和膠質(zhì)瘤細(xì)胞株中均呈高表達(dá)。膠質(zhì)瘤細(xì)胞中miR-92b、miR-222表達(dá)改變,可對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、克隆形成、凋亡產(chǎn)生影響。
4、r> 3.2DKK家族蛋白中的DKK3和DKK2分別是miR-92b和miR-222的靶基因。miR-92b、miR-222可通過各自靶基因影響Wnt信號(hào)通路中關(guān)鍵蛋白的表達(dá)。
3.3RNA干擾敲除miR-222表達(dá),對(duì)裸鼠皮下成瘤有抑制作用。
4結(jié)論
4.1膠質(zhì)瘤中miR-92b、miR-222呈高表達(dá),起到致癌基因的作用。抑制miR-92b、miR-222表達(dá),能顯著抑制腫瘤細(xì)胞增殖、克隆形成,促進(jìn)凋
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