MiR-18a調(diào)控neogenin的表達影響腦膠質(zhì)瘤細胞的增殖、遷移、侵襲.pdf

1、目的：
　　MiR-17-92基因簇在一些腫瘤中的致癌作用已有報道，miR-18a作為該基因簇的重要成員之一，在腦膠質(zhì)瘤中的作用目前尚不明確。Neogenin，是一個腫瘤抑制因子。本研究探討了miR-18a在膠質(zhì)瘤中的表達水平以及是否可通過調(diào)控neogenin的表達對膠質(zhì)瘤的生物學(xué)行為產(chǎn)生影響。
　　實驗方法：
　　1、Quantitative RT-PCR方法檢測miR-18a在膠質(zhì)瘤組織及細胞系中的表達水平。

2、>　　2、RT-PCR和westernblot方法檢測neogenin在膠質(zhì)瘤組織及細胞系中的表達水平。
　　3、雙熒光素酶報告基因?qū)嶒炑芯縨iR-18a與neogenin的靶向結(jié)合。
　　4、CCK-8，Transwell小室，流式細胞儀用來檢測膠質(zhì)瘤U87和U251細胞增殖、遷移、侵襲等生物學(xué)行為的變化。
　　5、統(tǒng)計學(xué)分析:所有實驗均獨立重復(fù)三次。所有實驗數(shù)據(jù)均以(x)±SD表示，并使用SPSS13.0軟件進行實

3、驗數(shù)據(jù)分析。組間比較采用單因素方差分析，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1、QuantitativeRT-PCR的結(jié)果顯示，miR-18a在膠質(zhì)瘤組織中的表達水平較正常腦組織顯著上調(diào)，且隨著膠質(zhì)瘤病理級別的增加而增加。與NHA細胞比較，在膠質(zhì)瘤U87和U251細胞的miR-18a的表達水平顯著上調(diào)。
　　2、RT-PCR及westernblot的結(jié)果顯示，膠質(zhì)瘤組織中neogenin的表達顯著低于

4、同源瘤旁組織及正常腦組織，且高級別膠質(zhì)瘤組織的表達低于低級別膠質(zhì)瘤組織。Neogenin在U87及U251細胞中的表達水平顯著低于NHA細胞中的表達。
　　3、雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)證明了miR-18a與neogenin3'-UTR的結(jié)合，且將miR-18ainhibitor轉(zhuǎn)染膠質(zhì)瘤U87和U251細胞使miR-18a的表達水平下調(diào)后，neogenin的mRNA和蛋白水平的表達顯著上調(diào)。
　　4、轉(zhuǎn)染miR-18ainhi

5、bitor下調(diào)膠質(zhì)瘤U87和U251細胞中miR-18a的表達后，CCK-8，Transwell小室，流式細胞儀的結(jié)果顯示，與miR-18ainhibitorNC組相比較，miR-18ainhibitor組顯著降低了膠質(zhì)瘤U87和U251細胞的增殖、遷移、侵襲力，并產(chǎn)生明顯的G0/G1期細胞周期阻滯，miR-18ainhibitor組顯著促進了細胞凋亡。
　　結(jié)論：
　　1、MiR-18a在膠質(zhì)瘤組織及細胞系U87和U251