牛病毒性腹瀉-粘膜病病毒E0、E2基因免疫原性的比較.pdf

1、牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)為黃病毒科，瘟病毒屬成員，是一種在世界范圍內(nèi)對(duì)造成家畜健康嚴(yán)重危害的病原。該病能引起患畜高熱、鼻內(nèi)粘膜及口腔出血或產(chǎn)生大量粘液、母牛奶量減少甚至停止產(chǎn)奶、懷孕母牛流產(chǎn)或產(chǎn)死胎、畸形胎等癥狀。牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)與豬瘟病毒和羊邊界病毒在血清學(xué)上有交叉反應(yīng)。目前為止，還沒有有效的預(yù)防和控制BVDV的措施，因此急需研制出新型理想的疫苗防制該病。本研究主要包括以下兩個(gè)部分內(nèi)容:
　　根據(jù)Genbank上

2、公布的牛病毒性腹瀉病毒NVDL株E2基因的序列，設(shè)計(jì)引物并進(jìn)行擴(kuò)增，回收純化PCR產(chǎn)物，克隆到pMD19-T載體中，將測(cè)序鑒定正確的目的基因克隆到真核表達(dá)載體pVAX1上，成功構(gòu)建了含有牛病毒性腹瀉病毒E2基因的真核表達(dá)載體pVAX1-E2.通過脂質(zhì)體介導(dǎo)重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，經(jīng)Western blot證實(shí)E2基因可在293T細(xì)胞中表達(dá)。隨后將重組核酸疫苗肌肉注射免疫小鼠，檢測(cè)一免、二免、三免的小鼠血清中和抗體效價(jià)，以及三免后的小鼠

3、淋巴細(xì)胞增殖情況。同時(shí)將重組質(zhì)粒聯(lián)合基因佐劑pVAX1-IL-2免疫小鼠，ELISA檢測(cè)結(jié)果表明，E0組有效的誘導(dǎo)特異性血清抗體的產(chǎn)生，而E2組效果不明顯。MTT檢測(cè)顯示兩組均大大促進(jìn)了特異性淋巴細(xì)胞的增殖，且E2組效果好于E0組。
　　對(duì)GenBank發(fā)表的牛病毒性腹瀉病毒NVDL株E0、E2基因序列進(jìn)行優(yōu)化，設(shè)計(jì)引物，擴(kuò)增出目的基因，定向克隆到原核表達(dá)載體pET系列中，構(gòu)建原核表達(dá)載體pET-28a-E0/pET-30a-E2