山東省豬瘟病毒流行株E2基因多態(tài)性分析和E2基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及免疫原性鑒定.pdf

1、豬瘟是由豬瘟病毒引起的一種高度接觸性傳染病，以高稽留熱、皮膚和黏膜廣泛出血為臨床特征，死亡率極高。豬瘟的流行給全球養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重影響了生豬及相關(guān)產(chǎn)品的進(jìn)出口貿(mào)易。我國(guó)是世界上豬瘟的主要流行地區(qū)之一，以隱性感染和散發(fā)流行為主要特點(diǎn)，流行情況復(fù)雜。開(kāi)展系統(tǒng)的豬瘟病毒流行病學(xué)調(diào)查，掌握豬瘟流行毒株變化規(guī)律和變異程度，研制新型豬瘟疫苗，對(duì)我國(guó)豬瘟防控工作有著極其重要的意義。具體研究?jī)?nèi)容和結(jié)果分為以下三部分:
　　1.山東

2、省豬瘟病毒流行毒株的分離和鑒定
　　本研究以2011年至2012年在山東省規(guī)?；i場(chǎng)采集的656份樣品為研究對(duì)象，通過(guò)RT-PCR技術(shù)檢測(cè)樣品中是否含有豬瘟病毒，結(jié)果136份樣品中檢出豬瘟病毒，陽(yáng)性率為20.66％。該結(jié)果說(shuō)明山東省內(nèi)規(guī)?；i場(chǎng)普遍存在豬瘟病毒感染。將檢出的陽(yáng)性樣品接種PK-15細(xì)胞，分離病毒，并通過(guò)RT-PCR和real-time PCR進(jìn)行鑒定。
　　2.山東省豬瘟流行毒株E2基因多態(tài)性研究
　　為

3、了進(jìn)一步了解山東省內(nèi)豬瘟的流行特點(diǎn)，通過(guò)RT-PCR手段獲得分離毒株的E2基因序列，然后將序列與參考毒株的E2基因序列進(jìn)行比對(duì)，分析流行毒株的基因多樣性。結(jié)果共分離獲得9株2.1亞型豬瘟病毒毒株且彼此的同源性極高，而分離毒株與疫苗株的核苷酸同源性和氨基酸同源性分別為79.5-81.6％和81.2-85.9％。這些數(shù)據(jù)表明山東省豬瘟流行毒株與疫苗毒株已有較大差異，并且繼續(xù)在向遠(yuǎn)離疫苗株的方向進(jìn)化。
　　3.豬瘟病毒E2基因真核表達(dá)裁

4、體的構(gòu)建及免疫原性鑒定
　　為了研究E2基因變化對(duì)其表達(dá)產(chǎn)物的免疫原性影響，我們將不同長(zhǎng)度E2基因片段插入真核表達(dá)載體pVAX-1中，構(gòu)建了一系列重組真核表達(dá)載體并分別命名為pVAX-999rE2、pVAX-900rE2、pVAX-540rE2，首先通過(guò)RT-PCR檢測(cè)和間接免疫熒光試驗(yàn)，驗(yàn)證重組真核載體能否在PK-15細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，然后免疫小鼠，通過(guò)ELISA試驗(yàn)和淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)來(lái)評(píng)估重組真核載體的免疫原性。研究結(jié)果為:經(jīng)RT-