Ⅱ型cGMP依賴性蛋白激酶對胃癌細胞增殖、遷移等生物學活性的影響.pdf

1、研究目的：研究Ⅱ型cGMP依賴性蛋白激酶(cGMP dependent protein kinaseⅡ，PKGⅡ)對人胃癌細胞增殖、遷移等生物學活性的影響。
　　 研究方法：
　　 (1)利用293A細胞擴增重組腺病毒載體Ad-PKGⅡ及空載體Ad-LacZ，感染人胃癌細胞AGS、BGC-823、SGC-7901，用X-gaL染色和Western blotting方法檢測重組腺病毒對胃癌細胞的感染效率及感染后目的蛋白的表

2、達。選擇對重組腺病毒敏感的胃癌細胞株進行后續(xù)實驗。
　　 (2)以特異性激活PKGⅡ的cGMP類似物8-pCPT-cGMP作用感染或未感染的胃癌細胞，激活PKGⅡ，通過MTr試驗、BrdU摻入實驗、增殖細胞核抗原(PCNA)的檢測，分析PKGⅡ?qū)θ宋赴┘毎鲋车挠绊?；用流式細胞術(shù)檢測PKGⅡ?qū)毎芷谶^程的影響。
　　 (3)DNA瓊脂糖凝膠電泳對DNA梯狀條帶分析及流式細胞術(shù)檢測高表達和活性增高的PKGⅡ?qū)θ宋赴┘毎?/p>

3、亡的影響。
　　 (4)通過Boyden槽遷移率分析法、刮除-遷移分析法和軟瓊脂培養(yǎng)、裸鼠攜瘤實驗，觀察高表達和活性增高的PKGⅡ?qū)θ宋赴┘毎鸅GC-823遷移和致瘤性的影響。
　　 研究結(jié)果：
　　 (1)擴增、鑒定重組腺病毒載體Ad-PKGⅡ和Ad-LacZ并感染胃癌細胞株，X-gaL染色和Western blotting結(jié)果表明，BGC-823對腺病毒最為敏感，在MOI=100時，感染效率為97±18％，且

4、持續(xù)高表達PKGⅡ蛋白。BGC-823細胞具有較強的增殖和遷移能力，所以選擇其為實驗細胞株。
　　 (2)PKGⅡ在胃癌細胞高表達和活性增高可以有效抑制細胞生長，使單個細胞DNA合成減少，對EGF引起的PCNA表達增高具有明顯的抑制作用，并可使大量細胞阻滯于G1期，S期細胞減少，表明活化的PKGⅡ可以有效抑制細胞的增殖和周期的進程。
　　 (3)流式細胞術(shù)及DNA瓊脂糖凝膠電泳分析發(fā)現(xiàn)，高表達和活化的PKGⅡ?qū)ξ赴┘毎?/p>

5、凋亡沒有明顯的影響。
　　 (4)PKGⅡ高表達和活性增高可以有效抑制人胃癌細胞BGC-823的遷移活動，減弱細胞附著非依賴性生長和抑制細胞在裸鼠體內(nèi)的成瘤。
　　 結(jié)論：
　　 PKGⅡ在胃癌細胞為低表達，感染重組腺病毒載體Ad-PKGⅡ后表達增高，以特異性激活PKGⅡ的cGMP類似物8-pCPT-cGMP作用后，可以有效抑制胃癌細胞BGC-823的增殖、遷移等生物學活性，而對細胞凋亡沒有明顯的影響。證實PKG