Ⅱ型cGMP依賴性蛋白激酶對胃癌細胞增殖相關MAPK-ERK信號轉導通路抑制作用的研究.pdf

1、研究目的：檢測Ⅱ型cGMP依賴性蛋白激酶(cGMP dependent protein kinaseⅡ,PKGⅡ)在腫瘤細胞高表達對增殖相關信號轉導通路MAPK/ERK的影響。研究PKGⅡ在基因調控中的作用。
　　 研究方法：
　　 (1)構建攜帶PKGⅡ基因的腺病毒載體。
　　 (2)篩選對PKGⅡ腺病毒感染敏感的胃癌細胞，感染PKGⅡ腺病毒，以8-pCPT-cGMP特異性激活PKGⅡ，通過Western bl

2、otting方法檢測ERK、Raf和Ras蛋白活性的變化，研究PKGⅡ對MAPK增殖相關信號轉導通路的影響。
　　 (3)以PKGⅡ腺病毒感染胃癌細胞BGC-823，以8-pCPT-cGMP特異性激活PKGⅡ，用mRNA差異顯示技術檢測PKGⅡ在基因調控中是否存在作用。
　　 研究結果：
　　 (1)成功構建了攜帶PKGⅡ的腺病毒載體。
　　 (2)用PKGⅡ腺病毒感染人胃癌細胞BGC-823、AGS和S

3、GC-790l，使其PKGⅡ表達增高，并以8-pCPT-cGMP特異性激活PKGⅡ，使得EGF引起的ERK的磷酸化(活性)增高受到顯著抑制。
　　 (3)用PKGⅡ感染腺病毒人胃癌細胞BGC-823、AGS和SGC-790l，使其PKGⅡ表達增高，并以8-pCPT-cGMP特異性激活PKGⅡ，使得EGF引起的Raf的磷酸化(活性)增高受到顯著抑制。
　　 (4)用PKGⅡ腺病毒感染人胃癌細胞BGC-823和SGC-790