血紅蛋白對于細菌刺激大鼠全血中性粒細胞產生生物學反應的影響.pdf

1、血紅蛋白類氧載體由于其獨特的氧結合特性和正常的生理代謝途徑等優(yōu)點成為近年來血液代用品方面研究的重點，鑒于豬血紅蛋白具有較高相似性及穩(wěn)定性，是一種吸引力很強HBOCs規(guī)模生產原料選擇的對象。隨著HBOCs產品研究的不斷深入，對于HBOCs產品的安全性及有效性的研究就顯得尤為重要，近年來對于HBOCs產品的有效性研究已證明其良好的載氧釋氧能力，但許多產品在臨床研究期間出現(xiàn)了嚴重的不良反應，在一定程度上限制了HBOCs的進一步發(fā)展，因此對HB

2、OCs產品安全性的研究就顯得尤為重要。 中性粒細胞是生物體非特異性免疫系統(tǒng)中十分重要的組成部分，目前普遍認為中性粒細胞是通過吞噬、滅活、消化等作用起到對外來物質的殺傷與消滅功能。我們近期通過對中性粒細胞呼吸爆發(fā)的研究發(fā)現(xiàn)，中性粒細胞在受到細菌刺激后，先后產生兩個相互分離的ROS峰，其中峰Ⅰ的ROS產量較小，持續(xù)時間較短且耗氧量大：峰Ⅱ的ROS產量大，持續(xù)時間長但無明顯耗氧。通過中性粒細胞的殺菌實驗發(fā)現(xiàn)，中性粒細胞可在短時間內(5

3、min內)滅活大量細菌，但吞噬細菌的中性粒細胞數(shù)量比率是隨時間延長而增加的，由此我們將中性粒細胞分為兩大類：易被外來物質激活、吞噬和/或消化活性伴隨明顯耗氧的早期反應中性粒細胞和激活緩慢、吞噬和/或消化活性不伴隨耗氧現(xiàn)象的遲緩反應中性粒細胞。 本文在以上研究成果的基礎下，著重討論了血紅蛋白對細菌刺激大鼠全血中性粒細胞產生生物學反應的影響。主要采用化學發(fā)光等檢測方法研究系統(tǒng)活性氧物質生成的變化，用細菌培養(yǎng)方法研究中性粒細胞抑菌殺菌

4、機制，采用細胞培養(yǎng)、染色、光學顯微鏡形態(tài)學方法研究測定中性粒細胞吞噬功能。本文首先建立了穩(wěn)定的化學發(fā)光反應系統(tǒng)，在最終確定反應條件下，Luminol—H2O2-HRP化學發(fā)光反應系統(tǒng)可在6min左右達到峰值，且峰值均在40萬光子數(shù)左右。之后在該化學發(fā)光反應系統(tǒng)下研究了細菌刺激大鼠全血反應系統(tǒng)中的各種因素對化學發(fā)光反應的影響，實驗結果得出，肝素、MEM及血紅蛋白均可不同程度的增強化學發(fā)光反應。但在細菌刺激大鼠全血化學發(fā)光系統(tǒng)中，無論單體血

5、紅蛋白還是聚合血紅蛋白，血紅蛋白的影響作用同在化學發(fā)光系統(tǒng)中的完全不同。隨著血紅蛋白濃度的增加，對化學系統(tǒng)的增強作用加大，對細胞系統(tǒng)中峰Ⅱ的抑制作用加大。排除其他可能影響因子，我們將血紅蛋白抑制細菌刺激大鼠全血化學發(fā)光的作用點定位到中性粒細胞，即遲緩反應中性粒細胞。并且推測血紅蛋白通過某種胞外機制影響中性粒細胞的ROS生成量。 同時我們發(fā)現(xiàn)，血紅蛋白的加入可增強大鼠全血對于細菌的殺滅效率，但這種增強作用并不是通過增加吞噬作用達到