中性粒細(xì)胞蛋白酶3在陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥血栓形成中的作用研究.pdf

1、目的：
　　陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥(Paroxysmal nocturnal hemoglobinuria，PNH)是一種獲得性造血干細(xì)胞基因突變的克隆性疾病，其病理機(jī)制為PIG-A基因突變致膜錨鏈蛋白缺失而引發(fā)功能性蛋白缺乏。臨床表現(xiàn)為血管內(nèi)溶血、骨髓衰竭及易形成血栓，血栓形成是危害性最大最常見(jiàn)的致死原因。血栓形成機(jī)制尚不明確，目前認(rèn)為可能與補(bǔ)體介導(dǎo)的溶血、一氧化氮（NO）的消耗、內(nèi)皮損傷、纖溶系統(tǒng)失調(diào)、血小板激活等因素有關(guān)，

2、它們均直接或間接源于溶血。近年研究發(fā)現(xiàn)―間接‖膜錨鏈蛋白酶3（proteinase3，PR3）是一種重要的抗凝調(diào)節(jié)因子，在PNH患者中表達(dá)明顯異常。本研究從基因水平和功能蛋白表達(dá)水平檢測(cè)PNH患者PR3，探究其在PNH患者血栓形成中的作用。
　　方法：
　　本研究以27例PNH患者為研究對(duì)象，25名為同期正常對(duì)照組，采用流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometry，F(xiàn)CM）檢測(cè)中性粒細(xì)胞膜表面錨鏈蛋白NB1和PR3的表達(dá)；采用酶

3、聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)PNH患者及同期正常對(duì)照組血漿中NB1、PR3和凝血酶受體1（PAR-1）的濃度；采用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)（real-time PCR，RT-PCR）檢測(cè)PNH患者及同期正常對(duì)照組PR3和NB1上游mRNA的表達(dá)，采用免疫印跡技術(shù)（Western blot,WB）檢測(cè)PNH患者及同期正常對(duì)照組中性粒細(xì)胞中總蛋白PR3的表達(dá)。整理并記錄患者和同期對(duì)照組D-二聚體檢測(cè)指標(biāo)，并將其與PR3、PAR-1做相關(guān)

4、性分析。
　　結(jié)果：
　　1.PNH患者中性粒細(xì)胞膜上PR3、NB1水平降低
　　PNH患者PNH細(xì)胞（CD59-PR3+/CD59-）膜上PR3的水平[（70.40±29.86）％]低于同期對(duì)照組正常細(xì)胞（CD59+PR3+/CD59+）膜上的水平[（93.28±10.53）%]（P=0.01）；PNH患者CD59+細(xì)胞（CD59+PR3+/CD59+）膜上PR3的水平[（85.68±22.21）%]與同期對(duì)照組正常

5、細(xì)胞（CD59+PR3+/CD59+）膜上的水平[（93.28±10.53）%]無(wú)顯著性差異（P=0.131）；PNH患者PNH細(xì)胞（CD59-PR3+/CD59-）膜上PR3的水平[（70.40±29.86）%]低于CD59+細(xì)胞（CD59+PR3+/CD59+）膜上的水平[（85.68±22.21）%]（P=0.046）。PNH患者PNH細(xì)胞（CD59-NB1+/CD59-）膜上NB1的水平[（20.61±26.07）%]低于同期對(duì)

6、照組正常細(xì)胞（CD59+NB1+/CD59+）膜上的水平[（67.72±19.65）%]（P=0.001）；PNH患者CD59+細(xì)胞（CD59+NB1+/CD59+）膜上NB1的水平[（72.25±25.62）%]與同期對(duì)照組正常細(xì)胞（CD59+NB1+/CD59+）膜上的水平[（67.72±19.65）%]無(wú)顯著性差異（P=0.46）；PNH患者在PNH細(xì)胞（CD59-NB1+/CD59-）膜上NB1的水平[（20.61±26.07）

7、%]低于在CD59+細(xì)胞（CD59+NB1+/CD59+）膜上的水平[（72.25±25.62）%]（P=0.001）。
　　2.PNH患者血漿中PR3的濃度（2262.72±802.80）pg/ml低于同期對(duì)照組（3292.92±651.68）pg/ml（P=0.001），血漿中NB1的濃度較正常對(duì)照組無(wú)明顯改變（P=0.32）。
　　3.PNH患者PR3、NB1的mRNA的水平均較同期對(duì)照組無(wú)顯著差異（P=0.629，

8、P=0.836）。
　　4.PNH患者中性粒細(xì)胞總蛋白PR3的水平較同期對(duì)照組無(wú)顯著差異。
　　5.PNH患者血漿中PAR-1濃度水平（1.38±0.96）ng/ml高于同期對(duì)照組（0.47±0.29）ng/ml（P=0.001）。
　　6．5例 PNH伴血栓患者D-Dimer水平高于22例PNH不伴有血栓的患者（P=0.049）。
　　7. PNH患者D-dmier與中性粒細(xì)胞膜PR3水平呈負(fù)相關(guān)（r=-0.5