鐵皮石斛不同栽培類型品質(zhì)評價研究.pdf

1、[目的]：
　　鐵皮石斛Dendrobium officinale Kimura et Migo為石斛屬名貴中藥材。其種子自然條件下難以萌發(fā)，藥材野生資源匱乏，市場上流通的幾乎都是人工栽培品。目前，由于在人工種植過程中常出現(xiàn)多種表型性狀差異的栽培類型（以下簡稱類型），這些類型引起藥材質(zhì)量上參差不齊。目前有關(guān)鐵皮石斛不同栽培類型品質(zhì)的研究還比較少，本研究旨在采用高效液相色譜法、紅外光譜法對鐵皮石斛不同栽培類型進行指紋圖譜的研究，同時

2、測定其所含的水分、總灰分、纖維素含量、多糖含量、總生物堿含量以及蘆丁含量，評價不同類型質(zhì)量的差異，并對優(yōu)質(zhì)鐵皮石斛類型進行體外抗氧化和抗腫瘤活性的初步研究，為鐵皮石斛種植生產(chǎn)以及質(zhì)量評價提供科學(xué)的參考依據(jù)。
　　[方法與內(nèi)容]：
　　1.鐵皮石斛主要栽培類型
　　采集浙江樂清產(chǎn)鐵皮石斛，采用游標(biāo)卡尺和直尺分別測量株高、莖上至下第3節(jié)中部直徑、另測由上至下第4片葉的葉片長和寬（其相對長寬比以長度和寬度之比表示）等形態(tài)指標(biāo)

3、、并對組成莖的節(jié)數(shù)做統(tǒng)計。采用Duncan's multiple-rangetest檢驗法對各指標(biāo)進行多重比較，并采用Origin軟件進行作圖分析，對農(nóng)藝性狀差異明顯的鐵皮石斛栽培類型進行研究。
　　2.鐵皮石斛水分、總灰分測定以及纖維素含量的測定
　　照2010版《中國藥典》附錄ⅨH方法對不同栽培類型鐵皮石斛中的水分進行了檢測;以2010版《中國藥典》附錄ⅨK法為參照測定總灰分的含量;參考相關(guān)文獻，測定其纖維素含量。

4、>　　3.鐵皮石斛中多糖、總生物和蘆丁的含量測定
　　采用紫外分光光度法測定鐵皮石斛中多糖和總生物堿的含量，采用高效液相色譜法測定鐵皮石斛以及葉片中蘆丁的含量，比較不同栽培類型鐵皮石斛有效成分的差異。
　　4.鐵皮石斛高效液相指紋圖譜的研究
　　本文對鐵皮石斛藥材進行了指紋圖譜研究，建立了鐵皮石斛藥材的高效液相指紋圖譜。
　　5.鐵皮石斛紅外指紋圖譜的研究
　　采用傅里葉紅外光譜儀對不同栽培類型的鐵皮石斛及

5、石斛屬其他石斛進行了研究，比較其差異性。
　　6.鐵皮石斛體外抗氧化和抗腫瘤活性的研究
　　采用Folin—Ciocaheu法、Larruri法、改動的Smirnoff水楊酸法分別測定優(yōu)質(zhì)栽培類型鐵皮石斛的總還原力、清除DPPH的能力、清除羥基自由基的能力，采用MTT法對鐵皮石斛進行抗腫瘤活性研究。
　　[結(jié)果]：
　　1.鐵皮石斛主要栽培類型
　　經(jīng)表觀描述和統(tǒng)計數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn):類型1(Y1)植株較矮、莖綠

6、色（有少量紫色斑點）、莖上下部粗細較一致、葉片較窄;類型2(Y2)植株較矮、莖紫色（有大量紫色斑點）、莖上下部粗細較一致、葉片較窄;類型3(Y3)植株較高、莖綠色（有少量紫色斑點）、莖上下部粗細較一致、葉片較寬;類型(Y4)植株較高、莖紫色（有大量紫色斑點）、莖上部粗下部細、葉片較寬;類型5(Y5)植株較高、莖綠色（有少量紫色斑點）、莖上部粗下部細、葉片較窄。各栽培類型之間均有不同程度的顯著性差異。
　　2.鐵皮石斛水分、總灰分測

7、定以及纖維素含量的涓定
　　5種栽培類型鐵皮石斛中的水分、總灰分測定結(jié)果表明:水分含量在8.5％-10.6％之間，總灰分在2.2％-3.3％之間，兩指標(biāo)均符合藥典鐵皮石斛項下的規(guī)定要求。纖維素含量則在11.8％-20.9％之間。
　　3.鐵皮石斛多糖、總生物堿和蘆丁的含量測定
　　鐵皮石斛中多糖和總生物堿的含量測定結(jié)果表明:多糖含量為25.52％-31.36％，是鐵皮石斛中的主要成分，其含量達到藥典規(guī)定要求;總生物堿含

8、量則為0.020％-0.036％之間，含量極低;莖及葉片中蘆丁含量分別為:0.068-0.132mg·g-1,0.667-1.373mg·g-1。
　　4.鐵皮石斛高效液相指紋圖譜的研究
　　采用梯度洗脫的方法，以Synergi-C18(250mm×4.60mm，5μm)為分析用色譜柱，以甲醇-0.04％磷酸水溶液為流動相梯度洗脫，流速0.8mL/min，檢測波長280nm，柱溫25℃。運用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)（國

9、家藥典委員會）進行分析。建立了以8個共有峰為特征信息的HPLC指紋圖譜，為鐵皮石斛質(zhì)量控制提供了參考依據(jù)。
　　5.鐵皮石斛紅外指紋圖譜的研究
　　5種栽培類型鐵皮石斛的整體紅外圖譜相近。二階導(dǎo)數(shù)處理后各圖譜有明顯的差異，具體表現(xiàn)為:在3000-2800 cm-1波數(shù)內(nèi)，Y1、Y2類型與其他類型有明顯的差異，尤以Y2最甚;在2500-2300 cm-1波數(shù)內(nèi)，各類型之間均有差別;在1200-650 cm-1波數(shù)內(nèi)，Y1類型與

10、其他類型有明顯差異。
　　石斛屬不同品種石斛粉末紅外圖譜在峰形、峰位上較一致，但鐵皮石斛在峰強度上明顯強于其他石斛，且鐵皮石斛在2126 cm-1有吸收，而其他石斛無;另其他石斛在2852 cm-1處有吸收，而鐵皮石斛無。對這10種石斛紅外光譜進行二階導(dǎo)數(shù)處理，發(fā)現(xiàn)在3000-2800 cm-1波數(shù)內(nèi)，鐵皮石斛與其他石斛有明顯的差異。在2550-2150cm-1波數(shù)內(nèi)，鐵皮石斛、兜唇石斛、米蘭石斛、黑毛石斛、齒瓣石斛與其他石斛均有

11、差異，并且相互之間也有差異。
　　6.鐵皮石斛體外抗氧化和抗腫瘤活性的研究
　　研究表明鐵皮石斛優(yōu)質(zhì)栽培類型的水提物具有較強的還原性、對DPPH的抑制率高達69.24％、對羥自由基的抑制率最高可達91.14％。體外抗腫瘤結(jié)果表明其對正常細胞HL7702生長無抑制，對腫瘤細胞A549、Hela229、HepG2增殖均有一定的抑制作用。
　　[結(jié)論]：
　　1.鐵皮石斛主要栽培類型的研究
　　在人工種植鐵皮石斛

12、的過程中，由于種源產(chǎn)地不同、栽培群體的多輪重組、栽培環(huán)境等原因，導(dǎo)致同一產(chǎn)地出現(xiàn)多種栽培類型。
　　2.鐵皮石斛水分、總灰分測定以及纖維素含量的測定
　　各栽培類型鐵皮石斛中水分、總灰分含量均符合藥典要求，纖維素含量具有顯著性差異。
　　3.鐵皮石斛多糖、總生物堿和蘆丁的含量測定
　　鐵皮石斛有效成分主要為多糖、生物堿、黃酮類等成分，多糖是鐵皮石斛中主要成分，而總生物堿由于含量極低，黃酮類成分蘆丁在鐵皮石斛以及其

13、葉片中均有分布且葉片中含量較高。本文建立的對多糖、總生物堿以及蘆丁含量的測定方法，具有準(zhǔn)確性高、穩(wěn)定性好、重復(fù)性佳等優(yōu)點，可為鐵皮石斛質(zhì)量評價及資源擴大利用提供科學(xué)的指導(dǎo)。
　　4.鐵皮石斛高效液相指紋圖譜的研究
　　采用高效液相色譜法建立以8個共有峰為特征信息的HPLC指紋圖譜，為鐵皮石斛鑒別提供了一定的參考依據(jù)。
　　5.鐵皮石斛紅外指紋圖譜的研究
　　采用紅外光譜技術(shù)，建立起簡單、快速、且不破壞藥材的鐵皮石