腺病毒介導(dǎo)胰島素樣生長(zhǎng)因子-1基因在Wistar大鼠體內(nèi)表達(dá)時(shí)間的研究.pdf

1、【目的】
　　 觀察腺病毒介導(dǎo)鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子-1（rlGF-1）基因在Wistar大鼠體內(nèi)的表達(dá)時(shí)間；以及三種不同rIGF-1基因注射途徑對(duì)其在體內(nèi)表達(dá)效果的影響。
　　 【方法】
　　 復(fù)蘇并培養(yǎng)293細(xì)胞，在293細(xì)胞中擴(kuò)增腺病毒。4-5周齡Wistar雄性大鼠（體重150g±lOg）180只，隨機(jī)分為對(duì)照組：①空白對(duì)照組，②腺病毒空載體（Ad-eGFP）對(duì)照組；實(shí)驗(yàn)組：⑨腹腔注射Ad-rIGF-1組，④

2、肌肉注射Ad-rIGF-1組，⑤胰腺被膜下注射Ad-rIGF-1組，每組各36只。每組并隨機(jī)分為6小組，小組編號(hào)為1-6，每小組6只。①空白對(duì)照組不做任何處理，②空載體對(duì)照組腹腔注射含Ad-eGFP的重組腺病毒液0.1ml，③④⑤組分別給予腹腔、肌肉、胰腺被膜下注射含Ad-rIGF-1的重組腺病毒液0.1ml。所有大鼠自由飲食。注射腺病毒后第3天、第7天、第14天、第21天、第28天，第35天依次處死編號(hào)1-6小組。處死大鼠后，立即取出

3、胰腺，分為兩部分，一部分中性福爾馬林固定，石蠟包埋固定做免疫組化觀察rIGF-1在胰腺局部含量；一部分-70℃凍存，做半定量RT-PCR，檢測(cè)rIGF-I基因在胰腺局部表達(dá)情況。留取大鼠血液標(biāo)本，離心取上清，測(cè)定血清IGF-1和胰島素水平。每周檢測(cè)第6小組大鼠體重和空腹血糖。
　　 【結(jié)果】
　　 腺病毒介導(dǎo)鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子-1基因在實(shí)驗(yàn)組有效表達(dá)，表達(dá)時(shí)間為腺病毒注射后第7天至第21天。ELISA法、免疫組化、逆轉(zhuǎn)錄

4、一聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）三種方法測(cè)得IGF-1在血液和胰腺局部升高情況一致，不同部位注射組無(wú)明顯差別。ELISA法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組血清胰島素較對(duì)照組降低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)組血糖較對(duì)照組無(wú)明顯差別，體重較對(duì)照組增長(zhǎng)明顯。未觀察到明顯副作用。
　　 【結(jié)論】
　　 1．腺病毒介導(dǎo)鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子-1基因在Wistar大鼠體內(nèi)有效表達(dá)，表達(dá)時(shí)間為注射基因后第7天至第21天。不同部位注射組之間無(wú)明顯差別。