干擾素誘生劑刺激肝細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子研究.pdf

1、目的： 在體外模型研究肝細(xì)胞能否被誘導(dǎo)產(chǎn)生干擾素等細(xì)胞因子，探討肝細(xì)胞在乙型肝炎病毒清除過程中可能發(fā)揮的作用。 方法： 選用聚肌胞(polyI：C)、植物血凝素(PHA)與結(jié)核菌素純蛋白衍生物(PPD)為細(xì)胞因子誘生劑，以誘生劑最大無(wú)毒濃度刺激HepG2細(xì)胞及2.2.15細(xì)胞，分別以無(wú)細(xì)胞因子誘生劑作用的HepG2細(xì)胞及2.2.15細(xì)胞為對(duì)照組，用雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)細(xì)胞上清液及細(xì)胞裂解液中24小時(shí)、48小

2、時(shí)IFN-αTNF-α與IFN-γ的含量，并檢測(cè)了2.2.15細(xì)胞被細(xì)胞因子誘生劑刺激后24小時(shí)、48小時(shí)細(xì)胞上清液及細(xì)胞裂解液中的HBV病毒標(biāo)志物sAg、eAg的含量。 結(jié)果： 1.PPD、polyI：C、PHA大無(wú)毒濃度分別是lOμg/ml、20μg/ml、30μg/ml；刺激HepG2后24hr，48 hr時(shí)點(diǎn)HepG2培養(yǎng)上清液及裂解液中均能產(chǎn)生IFN-α，與對(duì)照組比較有顯著性差異，其含量48hr時(shí)點(diǎn)大于24hr

3、時(shí)點(diǎn)，胞內(nèi)、胞外含量有顯著性差異；PPD、polyI：C與PHA刺激HepG2后，細(xì)胞上清液及裂解液均檢測(cè)出TNF-α，但與對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異，胞內(nèi)胞外含量無(wú)顯著性差異，不同時(shí)點(diǎn)間亦無(wú)顯著性差異；PPD、PHA、PoLyI：C刺激后上清液中均檢出IFN-γ，但與對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異，PPD、PHA刺激后細(xì)胞培養(yǎng)裂解液中檢測(cè)出IFN-γ，與對(duì)照組比較有顯著性差異，胞內(nèi)、胞外含量有顯著性差異；PoLyI：C刺激后培養(yǎng)細(xì)胞裂解液中檢出I

4、FN-γ，但與對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異，不同時(shí)點(diǎn)間無(wú)顯著性差異； 2.PPD、polyI：C、PHA以最大無(wú)毒濃度，刺激2.2.15細(xì)胞后，細(xì)胞裂解液、上清液均檢測(cè)出IFN-α，與對(duì)照組比較有顯著性差異，胞內(nèi)含量比胞外含量多，有顯著性差異，不同時(shí)點(diǎn)間無(wú)顯著性差異；細(xì)胞裂解液、上清液中均檢出IFN-γ、TFN-α；但與對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異，胞內(nèi)含量與胞外含量比，無(wú)顯著性差異，不同時(shí)點(diǎn)間無(wú)顯著性差異； 3.PPD、polyI

5、：C、PHA以最大無(wú)毒濃度，刺激2.2.15細(xì)胞，細(xì)胞裂解液、上清液清除sAg、eAg的效果與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異。 結(jié)論： 1.PPD、polyI：C、PHA能夠刺激HepG2細(xì)胞產(chǎn)生IFN-α并分泌至胞外，且IFN-α的量與誘生劑作用時(shí)間成正比。PPD、PHA能刺激HepG2細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ，但未能或未及分泌至胞外，IFN-γ的量與誘生劑作用時(shí)間長(zhǎng)短無(wú)關(guān)。polyI：C刺激HepG2細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ作用不明顯；