耐干擾素的HBV細(xì)胞模型的建立.pdf

1、目的：建立耐干擾素（IFN）的乙型肝炎病毒（HBV）細(xì)胞模型，為進一步探索HBV對IFN產(chǎn)生耐藥的機制提供實驗基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1.應(yīng)用HBV體外轉(zhuǎn)染細(xì)胞株HepG2.2.15，采用干擾素α-2b（IFNα-2b）低濃度（10～70 IU/mL）長期誘導(dǎo)，歷時48 wk建立HepG2.2.15/IFNα-2b細(xì)胞模型。
　　2.比較不同濃度IFNα-2b處理后HepG2.2.15細(xì)胞上清液中HBsAg、HBeAg

2、、HBV DNA的變化，從而選取最佳藥效濃度。
　　3.給予最佳藥效濃度IFNα-2b培養(yǎng)細(xì)胞4 d，ELISA法比較低劑量IFNα-2b誘導(dǎo)前后細(xì)胞上清液中HBsAg、HBeAg的表達。qPCR法比較低劑量IFNα-2b誘導(dǎo)前后細(xì)胞上清液中HBV DNA的變化。
　　4.通過MTT法比較IFNα-2b對HepG2.2.15和HepG2.2.15/IFNα-2b細(xì)胞的生長抑制情況。
　　5.經(jīng)最佳藥效濃度 IFNα-2

3、b處理后，利用 RT-PCR法比較 HepG2.2.15和HepG2.2.15/IFNα-2b細(xì)胞中OAS、MxA、ISGF3 mRNA的相對表達量。
　　結(jié)果：
　　1. HepG2.2.15細(xì)胞經(jīng)IFNα-2b處理后，HBsAg、HBeAg和HBV DNA的表達均有不同程度的抑制，且呈濃度依賴關(guān)系。當(dāng)濃度為1250 IU/mL，HBsAg、HBeAg、HBV DNA復(fù)制抑制率接近頂峰（抑制率分別為72.2%、49.3%、

4、58.8%），當(dāng)濃度加至1500 IU/mL時，抑制率增加較緩慢，可認(rèn)為1250 IU/mL為最佳藥效濃度。
　　2.經(jīng)低濃度IFNα-2b刺激12 wk后，50 IU/mL組對最佳藥效濃度IFNα-2b的敏感性顯著降低，與刺激前細(xì)胞比較，HBsAg、HBeAg、HBV DNA的抑制率分別降低了25.48%、8.40%、15.43%，認(rèn)為50 IU/mL為最佳刺激濃度。
　　3.經(jīng)50 IU/mL IFNα-2b分別刺激12

5、 wk～48 wk，發(fā)現(xiàn)36 wk后HBsAg、HBeAg、HBV DNA抑制率下降最明顯，與刺激前細(xì)胞比較，抑制率分別降低了39.49%、15.71%、30.16%，認(rèn)為36 wk為最佳刺激時間。
　　4. IFNα-2b對HepG2.2.15和HepG2.2.15/IFNα-2b細(xì)胞均有生長抑制作用，抑制率隨藥物濃度呈濃度依賴關(guān)系（p<0.05），并且相同濃度的 IFNα-2b，HepG2.2.15與HepG2.2.15/IF

6、Nα-2b細(xì)胞抑制率相當(dāng)（p>0.05），IC50大約為262284.63和226471.20 IU/mL。
　　5.經(jīng)1250 IU/mL的IFNα-2b處理后，HepG2.2.15/IFNα-2b細(xì)胞較HepG2.2.15細(xì)胞OAS、MxA、ISGF3 mRNA的表達水平均有不同程度的降低。
　　結(jié)論：
　　經(jīng) IFNα-2b持續(xù)誘導(dǎo)可使 HepG2.2.15對 IFNα-2b產(chǎn)生部分耐藥，其中50 IU/mL I