骨性關(guān)節(jié)炎相關(guān)基因MCF2L與滑膜成纖維細(xì)胞凋亡及炎癥反主尖的關(guān)系研究.pdf

1、目的:研究新近發(fā)現(xiàn)的骨性關(guān)節(jié)炎（Ostearthritis，OA）相關(guān)基因(Mcf.2 transforming sequence-like，MCF2L)的單核苷酸多態(tài)性(Single Nucleotide Polymorphisms，SNP)對于滑膜成纖維細(xì)胞分泌炎癥因子以及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡能力的影響，進一步揭示MCF2L在骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)病過程中的病理學(xué)意義。
　　方法:利用生物信息學(xué)分析等方法，收集與整理MCF2L基因突變體數(shù)據(jù)庫，

2、并預(yù)測1-2個可能具有潛在功能影響的SNP突變點進行后續(xù)研究;從小鼠原代滑膜成纖維細(xì)胞中調(diào)取MCF2L全長基因，在腺病毒載體中過表達MCF2L基因，構(gòu)建MCF2L過表達腺病毒，同時根據(jù)已知的突變體，構(gòu)建MCF2L突變體腺病毒，將MCF2L過表達腺病毒及突變體腺病毒感染小鼠原代滑膜成纖維細(xì)胞，蛋白印跡(western blot，WB)檢測MCF2L蛋白的表達情況，以雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法試驗(Enzyme-linked immunoso

3、rbent method test，ELISA)檢測其對OA滑膜細(xì)胞分泌白細(xì)胞介素1β(IL-1β)、基質(zhì)金屬蛋白酶-13(matrix metalloproteinase-13，MMP-13)、炎癥介質(zhì)前列腺素E2(PGE2)的影響，MTT試驗檢測細(xì)胞增殖情況，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡發(fā)生情況。
　　結(jié)果:①通過生物信息學(xué)分析，確定以MCF2L(R11L)突變體為后續(xù)研究的SNP突變體;②成功分離得到了原代滑膜成纖維細(xì)胞;

4、　　③成功獲得了經(jīng)測序驗證正確的鼠源MCF2L基因;④建立了滑膜成纖維細(xì)胞的過表達和突變體腺病毒;⑤ELISA檢測結(jié)果顯示， MCF2L(R11L)突變體腺病毒感染的滑膜成纖維細(xì)胞中IL-1β(164.72±20.43pg/ml，P＜0.05，具有統(tǒng)計學(xué)意義)、MMP-13(103.85±21.03pg/ml，P＜0.05，具有統(tǒng)計學(xué)意義)、PGE2（96.07±25.14pg/ml，P＜0.05，具有統(tǒng)計學(xué)意義）等炎癥因子的水平高于野

5、生型MCF2L過表達組;MTT結(jié)果顯示，突變株抑制滑膜成纖維細(xì)胞的增殖;流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，MCF2L(R11L)腺病毒感染的滑膜成纖維細(xì)胞的細(xì)胞凋亡率明顯高于空白對照組及MCF2L野生型過表達組。
　　結(jié)論:MCF2L(R11L)基因突變重組腺病毒感染滑膜成纖維細(xì)胞后，IL-1β、MMP-13、PGE2三類炎癥因子的表達水平明顯提高，是導(dǎo)致滑膜炎發(fā)生的重要致病因素。而MCF2L(R11L)基因突變導(dǎo)致滑膜成纖維細(xì)胞發(fā)生明顯凋亡，