2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?
  大量研究證實(shí)血漿中含量最高的脂肪因子脂聯(lián)素(Adiponectin,AD)參與類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid Arthritis,RA)的發(fā)病過(guò)程。我們前期工作證實(shí)RA患者滑膜組織中AD及AdipoR1表達(dá)明顯高于正常人群;而關(guān)節(jié)局部高表達(dá)的脂聯(lián)素可加重膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎小鼠(Collagen-induced arthritis,CIA)的骨破壞,其機(jī)制尚不十分清楚。RA滑膜成纖維細(xì)胞(Rheumatoid art

2、hritis synovialfibroblasts,RASFs)與OA滑膜成纖維細(xì)胞或皮膚的成纖維細(xì)胞有著迥然不同的特性,表現(xiàn)為異常增生能力、介導(dǎo)炎癥稽留、遷移及侵襲等類(lèi)腫瘤特性。其中,RASFs獨(dú)特的遷移和侵襲特性在RA骨侵蝕中起著至關(guān)重要的作用。因此本研究主要探討AD是否通過(guò)影響RASFs遷移性及侵襲性等類(lèi)腫瘤生物學(xué)特性,介導(dǎo)RA炎癥及骨侵蝕病理過(guò)程。
  1.AD對(duì)RASFs遷移及侵襲特性的影響
  體內(nèi)實(shí)驗(yàn):構(gòu)建膠

3、原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎(CIA)小鼠模型,小鼠關(guān)節(jié)局部注射脂聯(lián)素,觀(guān)察AD對(duì)CIA鼠關(guān)節(jié)炎癥及骨侵襲的影響。
  體外實(shí)驗(yàn):細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell coming實(shí)驗(yàn)觀(guān)察不同濃度AD(0、0.1、1和10μg/ml)與RASFs培養(yǎng)24h后對(duì)RASFs遷移的影響。用覆蓋明膠的Transwell corning實(shí)驗(yàn)觀(guān)察不同濃度AD(0、0.1、1和10μg/ml)與RASFs培養(yǎng)24h后對(duì)RASFs的侵襲作用。將AD受體(Adipon

4、ectin receptors,AdipoRs)沉默后,觀(guān)察AD對(duì)RASFs的遷移及侵襲特性的影響是否依賴(lài)AdipoRs。
  2.AD對(duì)RASFs基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)2,9表達(dá)的影響
  體內(nèi)實(shí)驗(yàn):觀(guān)察CIA小鼠關(guān)節(jié)局部滑膜組織中AD mRNA表達(dá)與MMP-2,MMP-9mRNA表達(dá)的相關(guān)性;觀(guān)察CIA小鼠關(guān)節(jié)局部注射AD后對(duì)關(guān)節(jié)組織中MMP-2,MMP-9表達(dá)的影響。
  體外實(shí)驗(yàn):Real-time PCR方

5、法及Western blot方法檢測(cè)AD是對(duì)RASFs中MMP-2,MMP-9表達(dá)的影響。觀(guān)察沉默AdipoRs后,AD對(duì)RASFs中MMP-2,MMP-9表達(dá)的影響。
  3.AD對(duì)RASFs內(nèi)PI3K/AKT信號(hào)通路的影響
  PI3K/AKT信號(hào)通路與細(xì)胞遷移、粘附、血管生成及細(xì)胞外基質(zhì)降解密切相關(guān)。用10μg/ml AD在不同時(shí)間點(diǎn)(0min、5min、10min、15min、30min、60min)刺激RASFs,

6、收取細(xì)胞,提蛋白,采用western blot方法檢測(cè)RASFs中PI3K、AKT磷酸化情況的變化。
  實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
  1.AD通過(guò)AdipoR1促進(jìn)RASFs遷移性及侵襲性
  體內(nèi)實(shí)驗(yàn):與CIA組鼠相比,CIA小鼠關(guān)節(jié)局部注射AD后,滑膜炎癥、滑膜增生及骨侵蝕明顯增加。
  體外實(shí)驗(yàn):AD(10μg/ml)組較空白組顯著促進(jìn)RASFs遷移通過(guò)Transwell小室微孔的數(shù)目(234.3±69.1Vs127.

7、3±42.5),且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05);AdipoR1沉默后,RASFs遷移(137.3±14.3Vs94±0.9)及侵襲(151.9±28.6Vs108.3±26.3)通過(guò)Transwell小室微孔的數(shù)目明顯減少,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。沉默AdipoR2,RASFs遷移數(shù)與未沉默組無(wú)明顯差異。
  2.AD通過(guò)AdipoR1促進(jìn)RASFs中MMP-2,MMP-9表達(dá)
  體內(nèi)實(shí)驗(yàn):CIA小鼠關(guān)節(jié)滑膜組織

8、中MMP-2、MMP-9 mRNA表達(dá)較正常小鼠組明顯增加;且MMP-2和MMP-9 mRNA表達(dá)與AD mRNA表達(dá)成正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)分別為r=0.6723,0.4569,顯著性p<0.05)。與未注射組相比,CIA組小鼠關(guān)節(jié)局部注射AD后,關(guān)節(jié)組織中MMP-2、MMP-9的表達(dá)明顯增高。
  體外實(shí)驗(yàn): AD(10μg/ml)組較空白組顯著促進(jìn)RASFs表達(dá)MMP-2(12.11±4.28 Vs2.19±1.32,P<0.05

9、)及MMP-9(26.12±13.74Vs2.80±2.30,P<0.05).沉默AdipoRs后,AdipoR1干擾組較空白載體干擾組(Negative Control,NC)組MMP-2(1.78±0.48Vs4.27±2.45),MMP-9(2.66±1.83Vs11.25±7.88)表達(dá)顯著下降且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。AdipoR2干擾組較空白載體干擾組MMP-2(4.14±2.17 Vs4.27±4.25),MMP-

10、9(5.26±2.80Vs11.25±7.88)表達(dá)下調(diào),但無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
  2.AD對(duì)RASFs內(nèi)PI3K/AKT信號(hào)通路
  AD刺激RASFs30min后,胞內(nèi)PI3K在開(kāi)始進(jìn)行磷酸化持續(xù)至60min。其中,AKT308位點(diǎn)在15min開(kāi)始磷酸化,30min達(dá)到磷酸化高峰;473位點(diǎn)在30min開(kāi)始進(jìn)行磷酸化持續(xù)至60min。
  實(shí)驗(yàn)結(jié)論:
  1.AD可促進(jìn)RASF遷移及侵襲特性,可能是其加重RA

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