薄層色譜生物自顯影跟蹤分離天然乙酰膽堿酯酶抑制劑的研究.pdf

1、阿爾茨海默病(AD)是造成老年癡呆的最主要原因，是一種進(jìn)行性和致命性疾病。迄今為止，AD的發(fā)病機(jī)制尚未明確，但是在眾多假說(shuō)中膽堿能學(xué)說(shuō)和β-淀粉樣蛋白學(xué)說(shuō)得到了最廣泛的支持。這兩種學(xué)說(shuō)都表明乙酰膽堿酯酶(AChE)和AD的形成密切相關(guān)，會(huì)從多個(gè)方面加重AD患者的癥狀。目前，抑制AChE活性從而間接增強(qiáng)膽堿能活性仍然是治療AD最有效的方法。植物中含有許多活性好、毒性低的天然AChE抑制劑(AChEI)，為了準(zhǔn)確快速的得到活性單體化合物，本

2、文對(duì)薄層色譜(TLC)生物自顯影方法在跟蹤分離天然乙酰膽堿酯酶抑制劑方面的應(yīng)用進(jìn)行了研究。
　　 首先，對(duì)現(xiàn)有的TLC生物自顯影方法進(jìn)行了改進(jìn)和優(yōu)化，將所用酶溶液的濃度從原方法中的6.67U/mL降低到1.0U/mL，大大降低了實(shí)驗(yàn)所需費(fèi)用。酶用量降低后TLC方法的檢測(cè)限降低了兩個(gè)數(shù)量級(jí)，這對(duì)發(fā)現(xiàn)植物中微量的AChEI非常有利。此外，對(duì)顯色背景等進(jìn)行了優(yōu)化，使TLC生物自顯影方法更適合于在活性成分跟蹤分離過(guò)程中使用，并建立了排除

3、假陽(yáng)性結(jié)果的實(shí)驗(yàn)方法，進(jìn)一步提高了方法的準(zhǔn)確率和結(jié)果的可信度。
　　 然后，用改進(jìn)的TLC生物自顯影方法結(jié)合假陽(yáng)性排除實(shí)驗(yàn)對(duì)31種植物提取物進(jìn)行了抗AChE活性測(cè)試，發(fā)現(xiàn)荷葉、獨(dú)活、五味子、徐長(zhǎng)卿、香附、細(xì)辛、白芍很有可能含有天然AChEI。對(duì)荷葉總生物堿提取物進(jìn)一步分離，得到了一種未被報(bào)道過(guò)的活性較好的天然AChEI，2-羥基-1-甲氧基阿樸啡，其IC50值為5.3±0.4μM。動(dòng)力學(xué)研究表明，2-羥基-1-甲氧基阿樸啡是AC