PPV VP2基因重組PCV2 ORF2基因病毒樣顆粒的獲得與部分生物學(xué)特性研究.pdf

1、將擴(kuò)增得到的PPV SC-1株VP2基因產(chǎn)物插入真核表達(dá)載體pPI-2．EGFP中，得到了重組質(zhì)粒pPI-2．EGFP．VP2。再以含有PCV2 SC株全基因組的重組質(zhì)粒pMD-PCV為模板擴(kuò)增PCV2 ORF2基因，進(jìn)一步將其插入pPI-2．EGFP．VP2中，構(gòu)建含有PPV VP2基因、PCV2 ORF2基因及EGFP報(bào)告基因的真核表達(dá)載體pPI-2．EGFEVP2．ORF2。用脂質(zhì)體介導(dǎo)法將pPI-2．EGFP．VP2．ORF2

2、DNA轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞Vero細(xì)胞，觀察到了綠色熒光蛋白的融合表達(dá)，再將綠色熒光明顯的Vero細(xì)胞制備電鏡樣品，觀察到了PPV VP2形成的VLPs。將pPI-2．EGFEVP2．ORF2 DNA免疫健康仔豬，并檢測(cè)血中T淋巴細(xì)胞的動(dòng)態(tài)變化，以及血清中PPV、PCV2抗體變化。結(jié)果顯示：免疫仔豬的CD<,3><'+>、CD<,4><'+>T淋巴細(xì)胞在外周血淋巴細(xì)胞中的比率均有一定程度的升高；而CD<,8><'+>T淋巴細(xì)胞在免疫后7-1

3、4d時(shí)有所下降，之后再升高。同時(shí)從血清中檢測(cè)出較高水平的PPV、PCV2特異性抗體。這說(shuō)明pPI-2．EGFP．VP2．ORF2轉(zhuǎn)染后形成的PPV VP2基因重組PCV2 0RF2基因病毒樣顆粒具有良好的免疫原性。同時(shí)本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建的pPI-2．EGFEVP2．ORF2質(zhì)粒載體中，含有偽狂犬病毒非必需基因區(qū)gI片段，可與偽狂犬病毒(Pseudorabies virus，PRV)發(fā)生同源重組，進(jìn)而構(gòu)建PRV-PPV-PCV2三聯(lián)基因工程疫苗。