PCV2 ORF2基因與佐劑基因Ag85A共表達重組腺病毒的構(gòu)建及其免疫原性研究.pdf

1、豬圓環(huán)病毒病(PCVDs)是由豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)引起的免疫抑制性疾病，給養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大經(jīng)濟損失。目前該病尚無特效治療方法，疫苗是該病防治的重要手段。
　　為了研制一種更加安全，有效的PCV2疫苗，本研究選取PCV2 ORF2基因羧基端基因片段、佐劑基因Ag85A作為靶基因，通過IRES序列連接，依次嵌入重組腺病毒穿梭質(zhì)粒中，構(gòu)建了能夠單獨表達ORF2基因片段的重組腺病毒rAd5 CMV-ORF2及協(xié)同表達兩段靶基因的重組腺

2、病毒 rAd5 CMV-ORF2-IRES-Ag85A。經(jīng)熒光定量 PCR、RT-PCR、Westen-blot檢測，兩株重組腺病毒均能夠正確表達外源基因，且所表達外源蛋白具有良好的反應(yīng)原性；能夠感染HEK293細胞進行病毒增殖，達到較高的病毒滴度，且具有良好的遺傳穩(wěn)定性。
　　兩株重組腺病毒分別對小鼠及仔豬進行了兩次免疫，均能夠刺激動物機體產(chǎn)生針對PCV2的特異性抗體并維持穩(wěn)定水平，表現(xiàn)良好的免疫原性。小鼠免疫試驗中，除第35d

3、之外，重組腺病毒rAd5 CMV-ORF2-IRES-Ag85A免疫組產(chǎn)生的特異性抗體水平均高于rAd5 CMV-ORF2免疫組，兩組差異顯著(P≤0.05)。仔豬免疫試驗中， rAd5 CMV-ORF2-IRES-Ag85A免疫組體抗體水平在二免后明顯高于rAd5 CMV-ORF2抗體水平(P≤0.05)，且第21d后抗體效價均差異顯著(P≤0.05)。免疫試驗說明：佐劑基因Ag85A具有一定的免疫促進作用。
　　試驗結(jié)果初步表