細粒棘球絳蟲原頭蚴蛋白質(zhì)組學研究及生物信息學分析.pdf

1、目的：在前期研究的基礎上,通過雙向電泳條件的優(yōu)化,對細粒棘球絳蟲原頭蚴進行蛋白質(zhì)組學和生物信息學分析,進一步研究原頭蚴蛋白質(zhì)的基礎構成和功能情況,尋找具有特異性的靶標蛋白,為包蟲病的早期診斷、新藥開發(fā)、疫苗篩選,提供理論依據(jù)。
　　方法：1.取寧夏醫(yī)科大學總醫(yī)院肝膽外科包蟲病人術后的包囊,經(jīng)無菌分離細粒棘球絳蟲原頭蚴。2.對原頭蚴蛋白質(zhì)樣品并進行雙向電泳分離,并對雙向電泳條件進行優(yōu)化。3.選擇分離的蛋白點進行MALDI-TOF/M

2、S檢測得到肽指紋圖譜PMF。4.將PMF數(shù)據(jù)提交到互聯(lián)網(wǎng)中蛋白信息研究數(shù)據(jù)庫中,與已有的蛋白信息進行匹配分析,初步鑒定出樣本中蛋白質(zhì),通過COGs(ClustersofOrthologousGroupsofproteins)蛋白質(zhì)直系同源簇數(shù)據(jù)庫、GO(GeneOntology)蛋白質(zhì)功能分類數(shù)據(jù)庫、KEGGpathway蛋白質(zhì)代謝通路數(shù)據(jù)庫,分析這些蛋白的功能與性質(zhì)。5.利用免疫印跡的方法,用包蟲病人的血清識別原頭蚴抗原,并進行質(zhì)譜鑒

3、定及生物信息學分析。
　　結果：1.通過原頭蚴蛋白質(zhì)樣品的雙向電泳分析,獲得了330個蛋白點。2.從雙向電泳凝膠上切下來的蛋白點通過MALDI-TOFMS質(zhì)譜檢測,原頭蚴樣品中有157個蛋白點獲得了肽指紋圖譜(PMF)數(shù)據(jù)。3.初步鑒定了細粒棘球蚴原頭蚴中的部分蛋白點,共有49個蛋白點。4.對鑒定得到的蛋白點,我們進行了生物信息學的初步分析,發(fā)現(xiàn)這些蛋白主要與細胞組成、新陳代謝、信號轉導以及物質(zhì)運輸有關。5.對原頭蚴蛋白利用包蟲病