超聲聯(lián)合載卡莫司汀脂質(zhì)微泡治療大鼠腦膠質(zhì)瘤的研究.pdf

1、目的：研究自制載卡莫司汀脂質(zhì)超聲微泡在超聲的作用下體外誘導(dǎo)大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞凋亡及抗大鼠腦膠質(zhì)瘤生長的作用，探討卡莫司汀超聲微泡靶向治療神經(jīng)膠質(zhì)瘤的療效和可能的生物學(xué)機(jī)理，為臨床應(yīng)用提供的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 1.載卡莫司汀脂質(zhì)超聲造影劑制備及特性的研究：采用機(jī)械振蕩法制備載卡莫司汀脂質(zhì)超聲造影劑，顯微鏡下觀察并計算其濃度、馬爾文測量其粒徑大小、分布、電位，高效液相色譜法測量藥物的包封率。微泡經(jīng)冷凍干燥與60鈷輻照消毒

2、后，經(jīng)兔耳緣靜脈注射，觀察其在兔肝內(nèi)顯像效果。 2.載藥微泡聯(lián)合超聲體外誘導(dǎo)C6細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)：采用MTT法檢測各實(shí)驗(yàn)組不同時間點(diǎn)的OD值，并得出各組的細(xì)胞抑制率；檢測不同處理方法、不同時間點(diǎn)對C6細(xì)胞增值的影響，并確定實(shí)驗(yàn)參數(shù)。流式細(xì)胞儀分析C6細(xì)胞的凋亡率（FITC-Annexin V/PI雙染法）及細(xì)胞周期（PI單染法）。AO-EB雙染后熒光顯微鏡觀察C6細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化；透射及掃描電鏡觀察C6細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變。

3、 3.超聲作用于自制載藥微泡后對大鼠顱內(nèi)膠質(zhì)瘤的生長抑制作用：使用大鼠顱內(nèi)立體定位儀建立Wistar大鼠顱內(nèi)腦膠質(zhì)瘤模型，MRI、HE染色及免疫組化法確定大鼠膠質(zhì)瘤模型的成功建立。將40荷瘤鼠隨機(jī)分為四組：①空白對照組；②單純藥物組；③單純超聲組；④超聲+載藥微泡，MRI評估處接種后7d、14d、21d各組腫瘤體積的大小，采用RT-PCR半定量各實(shí)驗(yàn)組觀察腫瘤內(nèi)BAX、BCL-2凋亡相關(guān)基因的改變。 結(jié)果： 1.載卡莫司

4、汀脂質(zhì)超聲造影劑的物理特性：載藥微泡的濃度為（2.6～3.1）×109/ml，平均粒徑為1.05μm±0.20μm；卡莫司汀包封率為（42.6±0.11）％；電位為-（12.93±1.84）mV；經(jīng)兔耳緣靜脈注射后，兔肝內(nèi)可見持續(xù)的增強(qiáng)顯像效果。 2.超聲聯(lián)合載卡莫司汀脂質(zhì)微泡的體外實(shí)驗(yàn)：超聲+10％載卡莫司汀超聲微泡組在6h時段細(xì)胞抑制率、細(xì)胞凋亡率均最高，與其他實(shí)驗(yàn)組及對照組相比差異均有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），超聲破

5、壞載藥微泡使細(xì)胞增殖期（S期）比例減少。AO-EB雙染后熒光顯微鏡觀察及電鏡觀察超聲聯(lián)合載藥微泡C6細(xì)胞出現(xiàn)凋亡形態(tài)學(xué)改變。 3.超聲聯(lián)合載卡莫司汀脂質(zhì)微泡的動物實(shí)驗(yàn)：成功建立了大鼠顱內(nèi)膠質(zhì)瘤模型。分組處理后MRI結(jié)果顯示，超聲+載藥微泡組腫瘤體積明顯小于對照組及其他處理組，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；超聲+載藥微泡組使大鼠腫瘤組織內(nèi)抗凋亡基因Bcl-2表達(dá)降低，Bcl-2/Bax的比值下降，而Bax基因表達(dá)未見明顯變

6、化，與對照組及其他處理組比較，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。 結(jié)論： 1.成功制備載卡莫司汀脂質(zhì)超聲造影劑，其粒徑小、分布均勻，體內(nèi)顯影效果好，符合一般超聲造影劑的特點(diǎn)。 2.自制的載卡莫司汀脂質(zhì)微泡能在超聲波的作用下誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的C6細(xì)胞凋亡，并能抑制大鼠顱內(nèi)膠質(zhì)瘤的體積增長；通過下調(diào)Bcl-2抗凋亡基因及Bcl-2/Bax的比值抑制腫瘤細(xì)胞的生長。超聲聯(lián)合載卡莫司汀脂質(zhì)微泡的研究為膠質(zhì)瘤治療提供一種新