菊花緩慢生長(zhǎng)離體保存研究.pdf

1、建立在組織培養(yǎng)基礎(chǔ)上的緩慢生長(zhǎng)離體保存是在保證植物種質(zhì)遺傳完整性的前提下減緩試管苗的生長(zhǎng)，減少繼代次數(shù)，達(dá)到中期保存植物種質(zhì)資源的目的，是植物種質(zhì)保存中常用的方法。本研究以夏花型盆栽小菊品種‘火炬’和秋花型切花菊品種‘神馬’的無(wú)菌試管苗為材料，研究了試管苗保存過(guò)程中不同添加物和不同培養(yǎng)條件對(duì)保存效果的影響，并從形態(tài)學(xué)、同工酶水平及分子水平對(duì)保存材料再生后代的遺傳穩(wěn)定性進(jìn)行檢測(cè)，以期為實(shí)現(xiàn)菊花種質(zhì)資源的中長(zhǎng)期保存提供理論和實(shí)踐依據(jù)。主要研

2、究結(jié)果如下： 1．培養(yǎng)基養(yǎng)分水平對(duì)菊花試管苗離體保存的影響 室溫(25±2)℃下，1/4MS或1/2MS+0.3mg.L<'-> 6-BA+0.1mg.L<'->NAA+30g.L<'->蔗糖+7g.L<'->瓊脂均能有效減緩‘火炬’試管苗的生長(zhǎng)，12個(gè)月后均100％存活，而對(duì)‘神馬’的抑制效果則不理想。 2．植物生長(zhǎng)抑制物質(zhì)對(duì)菊花試管苗離體保存的影響 Ms+0.3mg.L<'-> 6-BA+0.1mg.

3、L<'->NAA+30g.L<'->蔗糖+7g.L<'->瓊脂的伸長(zhǎng)培養(yǎng)基中分別添力口1250～2000mg.L<'->CCC、200～600mg.L<'->B<,9>、35～140mg.L<'->SA均能使‘火炬’和‘神馬’兩個(gè)品種試管苗延長(zhǎng)保存至10個(gè)月以上，尤以1750mg.L<'->CCC、200mg.L<'-> B<,9>、140mg.L<'->SA的保存效果較為理想，試管苗保存10個(gè)月后生長(zhǎng)健壯，株高矮小適宜，‘火炬’和‘神

4、馬’兩個(gè)品種存活率分別為74.07％和40.74％、81.48％和74.07％，100％和100％。20mg.L<'-> ABA適宜于‘火炬’試管苗的離體保存，‘神馬’則是80mg.L<'->的ABA抑制效果最好，兩個(gè)品種的試管苗分別在這兩個(gè)濃度下保存10個(gè)月后均100％存活，且植株生長(zhǎng)良好。3～5mg.L<'->PP<,333>和5～9mg.L<'-> PP<,333>分別能使‘火炬’和‘神馬’比CK延長(zhǎng)存活3個(gè)月，而高濃度(7～9m

5、g.L<'->)PP<,333>對(duì)‘火炬’試管苗有毒害作用，3mg.L<'-> PP<,333>對(duì)‘神馬’試管苗抑制作用不明顯。 3．蔗糖及甘露醇對(duì)菊花試管苗離體保存的影響 0～10g.L<'->蔗糖可用于‘神馬’試管苗的短期(如越夏)保存，對(duì)于‘火炬’則不適宜，高濃度(60～90g.L<'->)蔗糖可使‘火炬’試管苗的保存時(shí)間延長(zhǎng)至7個(gè)月以上，但對(duì)于‘神馬’則具有加快衰老的作用。培養(yǎng)基中5～10g.L<'->甘露醇完全

6、替代蔗糖可使‘神馬’試管苗比cK延長(zhǎng)存活7個(gè)月；10、30g.L<'->蔗糖+10g.L<'->甘露醇，10、20g.L<'->蔗糖+20g.L<'->甘露醇均能使菊花試管苗連續(xù)保存12個(gè)月，其中，后兩個(gè)組合處理保存12個(gè)月后成活率較高，分別達(dá)到50.00％、60.00％。無(wú)論是甘露醇完全替代蔗糖還是與蔗糖配合使用，均不適宜于‘火炬’的離體保存。 4．不同低溫處理對(duì)菊花試管苗離體保存的影響 接種在伸長(zhǎng)培養(yǎng)基中的‘火炬’和

7、‘神馬’的去葉莖段直接置于4℃低溫、‘火炬’的去葉莖段和‘神馬’的帶葉莖段直接置于10℃低溫、‘火炬’的去葉或帶葉莖段不經(jīng)過(guò)預(yù)培養(yǎng)和‘神馬’的帶葉莖段正常條件下預(yù)培養(yǎng)15d后置于15℃低溫下進(jìn)行保存，植株生長(zhǎng)緩慢，株高均大幅度降低，且保存12個(gè)月后仍保持較高的存活率，分別為74.07％和77.78％、100％和74.07％、85.19％和81.48％。 5. 10、15℃低溫下培養(yǎng)基養(yǎng)分水平、PP<,333>和CCC對(duì)菊花試管苗

8、離體保存的影響 ‘火炬’的去葉莖段接種在MS上于10～15℃下保存12個(gè)月后，植株生長(zhǎng)良好，且100％存活。10、15℃低溫下，試管苗保存12個(gè)月后，添加PP<,333>及CCC各處理的存活率高于室溫下相應(yīng)處理，但低于相應(yīng)溫度下的CK，其中，兩個(gè)品種的試管苗在附加3mg.L<'-1>PP<,333>的培養(yǎng)基上于10℃下保存12個(gè)月后，存活率較高，同于或接近最高的CK處理，且植株長(zhǎng)勢(shì)良好、矮小健壯、葉色濃綠；‘火炬’試管苗在附加1