不同年齡層SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞生物學(xué)特性的比較.pdf

1、由于骨髓間充質(zhì)干細胞(Mesenchymal Stromal Cells，MSCs)具有多向分化潛能，而且易于獲得，所以近年來隨著基因工程興起，不少學(xué)者把骨髓間充質(zhì)干細胞作為基因治療靶細胞，治療某些難治疾病，比如骨缺損、椎間盤退行性疾病、心力衰竭等等，而這些疾病的患病人群多為老年患者，可能跟衰老機體中的骨髓間充質(zhì)干細胞的生長和分化發(fā)生一定改變有關(guān)，因此，探討間充質(zhì)干細胞的生物學(xué)特性，以及其功能隨著年齡增長是否發(fā)生改變尤為重要。本次實驗通

2、過對不同年齡層SD大鼠的骨髓間充質(zhì)干細胞的生物學(xué)特性進行比較分析，探討年齡對間充質(zhì)干細胞的影響。
　　目的:
　　研究不同年齡SD大鼠的骨髓間充質(zhì)干細胞的生物學(xué)特性，并探討不同年齡SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞生物學(xué)特性的影響。
　　方法:
　　分別取幼年（21天）、中年（3個月）、老年（14個月）的SD大鼠，取四肢骨髓，采用沖骨髓細胞貼壁培養(yǎng)法，用含10％體積分數(shù)胎牛血清(FCS)的低糖DMEM(L-DMEM)培養(yǎng)基

3、，貼壁、傳代、培養(yǎng)、純化出MSC，使其在體外擴增生長，在倒置顯微鏡下觀察生長特性，瑞氏染色觀察細胞形態(tài)。流式細胞術(shù)檢測細胞表面抗原。分別取每個年齡階段細胞的第3代、第6代、第9代、第12代和第15代做MTT，繪制生長曲線，比較細胞的增殖能力。取每個年齡層的第3代的MSCs做成骨誘導(dǎo)分化和成脂肪誘導(dǎo)分化，觀察年齡差異對其成成骨細胞的能力和成脂肪細胞的能力的影響。通過茜素紅半定量法比較鈣鹽沉積情況。通過油紅O定量法比較3個年齡層SD鼠MSC

4、s的成脂能力。通過檢測ALP的值，來比較年齡對MSCs成骨能力的影響。
　　結(jié)果:
　　(1)經(jīng)流式細胞術(shù)鑒定出細胞表面抗原95.27±0.52 CD29，CD44為陽性，4.06±0.29 CD34，CD45為陰性，證明通過沖骨髓細胞貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)出的細胞為骨髓間充質(zhì)干細胞。
　　(2)倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)，幼年組，中年組，老年組的SD大鼠的MSC的原代都是呈集落樣生長，并且其中有許多雜細胞，經(jīng)過一次胰酶消化傳代

5、后，細胞均呈梭形，不再有集落產(chǎn)生，第3，4代，細胞形態(tài)趨于穩(wěn)定，雜細胞逐漸減少，各組間沒有差異。
　　(3) MTT結(jié)果顯示，第3、6代的3個年齡組比較，增殖能力無顯著差異，但在第9代、第12代和第15代，幼年組的增殖能力顯著高于中年和老年組。
　　(4)成脂肪細胞誘導(dǎo)和成骨細胞誘導(dǎo)的結(jié)果顯示，幼年SD大鼠的間充質(zhì)干細胞誘導(dǎo)出的鈣結(jié)節(jié)明顯，且數(shù)目顯著多于中年組和老年組，而中年組多于老年組。誘導(dǎo)出的成脂肪細胞，脂泡在數(shù)量上幼年