針刺調(diào)控胃動(dòng)力作用中Cajal細(xì)胞生物學(xué)改變及其部分細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑研究.pdf

1、現(xiàn)代大量研究均表明，胃經(jīng)穴位電針對(duì)胃腸功能有良好的調(diào)整作用，但其確切機(jī)制仍未完全闡明。進(jìn)一步闡明電針足三里穴對(duì)胃運(yùn)動(dòng)、胃電雙向調(diào)節(jié)的發(fā)生機(jī)制，對(duì)指導(dǎo)臨床治療具有重要的意義。本實(shí)驗(yàn)在電針大鼠足三里穴情況下，在觀察胃電圖變化的基礎(chǔ)上，研究針刺足三里穴引起胃電起搏區(qū)Cajal間質(zhì)細(xì)胞（interstitialcellsofcajal,ICCs)的變化及與ICCs信息傳遞密切相關(guān)的縫隙連接蛋白43(CX43)的變化、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK

2、）家族中的ERK的變化情況，并同步采用基因芯片技術(shù)，研究電針大鼠足三里穴引起信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及標(biāo)志基因的變化，為探討電針對(duì)胃運(yùn)動(dòng)的調(diào)節(jié)作用機(jī)制提供全新的理論依據(jù)。
　　方法：①將大鼠隨機(jī)分成足三里組、非經(jīng)非穴組、非針刺組，采用電生理學(xué)方法同步觀察電針后胃電的變化；②采用免疫組化熒光雙重標(biāo)記ICCs與CX43、ICCs與ERK的方法，觀察針刺足三里穴引起胃電起搏區(qū)ICCs的變化、與ICCs信息傳遞相關(guān)的CX43的變化、絲裂原活化蛋白激酶

3、（MAPK）家族中的ERK的變化情況；③采用基因芯片技術(shù)，按TRIZOL法抽提三個(gè)胃組織標(biāo)本總RNA，經(jīng)純化、逆轉(zhuǎn)錄合成摻入生物素標(biāo)記的cRNA合成探針，與美國(guó)SuperArray公司的OligoGEArray基因芯片雜交，掃描芯片熒光信號(hào)圖像，計(jì)算機(jī)分析，比較基因及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路差異。
　　結(jié)果：
　　1.電針足三里穴對(duì)胃電有明顯影響。電針足三里穴可使胃電頻率及波幅增高，提示電針足三里穴對(duì)胃動(dòng)力有明顯促進(jìn)作用。
　　2

4、.電針足三里穴可顯著激活胃肌間和肌層ICCs表達(dá),及與ICCs信息傳遞密切相關(guān)CX43的表達(dá)；電針足三里穴能促進(jìn)肌間和肌層與ICCs調(diào)節(jié)胃運(yùn)動(dòng)的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)之MAPK途徑中ERK的上調(diào)表達(dá)。
　　3.篩選出與針刺作用相關(guān)的標(biāo)志基因及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。三個(gè)標(biāo)本中，電針足三里組明顯差異表達(dá)的標(biāo)志基因hoxa1、lep、bcl-2上調(diào)，分屬于維甲酸通路、胰島素通路、Survival通路、雌激素通路、磷脂酶C通路；電針足三里組明顯差異表達(dá)的標(biāo)

5、志基因ptgs2下調(diào)，屬于磷脂酶C通路。其中l(wèi)ep基因的上調(diào)表達(dá)，與ICCs的激活呈正相關(guān)關(guān)系，而ptgs2基因的下調(diào)表達(dá)與ICCs的激活呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，可能在胃運(yùn)動(dòng)功能調(diào)節(jié)過程中發(fā)揮作用。
　　結(jié)論：電針足三里穴對(duì)大鼠胃電具有明顯的促進(jìn)作用；電針足三里穴促進(jìn)胃運(yùn)動(dòng)的機(jī)制可能通過激活I(lǐng)CCs而產(chǎn)生顯著電生理活動(dòng)、通過ICCs及SMC之間的縫隙連接蛋白傳遞達(dá)到平滑肌進(jìn)而調(diào)節(jié)胃運(yùn)動(dòng)。這一作用的完成，可能是通過ICCs信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)MAPK途徑