灰葡萄孢中產(chǎn)孢相關(guān)基因的功能研究.pdf

1、灰葡萄孢是一種氣傳性植物病原真菌，它能夠侵染200多種植物，包括番茄、草莓、葡萄以及多種花卉?；移咸焰叩目鼓嫘詷O強(qiáng)，可靠菌核或分生孢子度過惡劣環(huán)境。研究灰葡萄孢菌核發(fā)育、分生孢子產(chǎn)生或致病機(jī)理可為有效防治灰霉病奠定理論基礎(chǔ)。本研究以灰葡萄孢菌絲生長時(shí)期和菌核發(fā)育時(shí)期的基因表達(dá)譜為基礎(chǔ)，挑選出了2個(gè)在這兩個(gè)階段基因表達(dá)量差異較大的基因BC1G_00689和BC1G_03293，并初步研究了它們的功能，取得了以下研究結(jié)果:
　　1.R

2、NA-seq結(jié)果表明基因BC1G_00689在菌核發(fā)育時(shí)期表達(dá)下調(diào)，表達(dá)量是菌絲生長時(shí)期的18％，該基因編碼一個(gè)包含酸性鞘磷脂酶結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)?；駼C1G_03293在菌核發(fā)育時(shí)期表達(dá)上調(diào)，表達(dá)量比菌絲生長時(shí)期上調(diào)了78倍。該基因編碼的蛋白質(zhì)與大腸桿菌中周質(zhì)空間麥芽糖結(jié)合蛋白的結(jié)構(gòu)相似度較高，目前在真菌中還沒有相關(guān)蛋白質(zhì)功能的報(bào)道。為了研究基因BC1G_00689的功能，我們通過同源重組的方法得到了敲除轉(zhuǎn)化子△BC1G_00689-1

3、9和△BC1G_00689-21。也得到了基因BC1G_03293的敲除轉(zhuǎn)化子△BC1G_03293-2和△BC1G_03293-4，并運(yùn)用基因互補(bǔ)技術(shù)得到了互補(bǔ)轉(zhuǎn)化子△BC1G_03293-2-C2和△BC1G_03293-2-C3。
　　2.敲除轉(zhuǎn)化子△BC1G_00689-19和△BC1G_00689-21的菌落形態(tài)、菌絲尖端形態(tài)、菌絲生長速度、對番茄葉片的致病力以及菌核干重與野生菌株B05.10相比無明顯差異，但敲除轉(zhuǎn)化子

4、的產(chǎn)孢量明顯下降，約為出發(fā)菌株B05.10產(chǎn)孢量的70％。結(jié)果說明BC1G_00689基因在灰葡萄孢產(chǎn)孢過程中可能發(fā)揮重要作用。
　　3.BC1G_03293基因敲除后產(chǎn)孢量明顯下降，大約為出發(fā)菌株B05.10產(chǎn)孢量的45％，并且BC1G_03293基因互補(bǔ)可使敲除轉(zhuǎn)化子的產(chǎn)孢量得到明顯恢復(fù)。在加麥芽糖和蔗糖的基本培養(yǎng)基上敲除轉(zhuǎn)化子的菌絲生長速度、菌落形態(tài)以及菌核干重與B05.10相比無明顯區(qū)別。結(jié)果說明BC1G_03293基因參