日本血吸蟲細(xì)胞體外培養(yǎng)條件與培養(yǎng)細(xì)胞生物學(xué)特性的研究.pdf

1、目的:探討日本血吸蟲染色體制備和細(xì)胞體外培養(yǎng)條件,并分析培養(yǎng)細(xì)胞的生物學(xué)特性.方法:1.采用20 μg/ml的秋水仙素處理童蟲,制備染色體標(biāo)本并進(jìn)行G帶顯帶,然后對(duì)其染色體核型及G帶帶型進(jìn)行分析;2.選取5種促進(jìn)細(xì)胞增殖的因子,采用正交設(shè)計(jì),配制16種條件培養(yǎng)基,對(duì)18d Sj童蟲細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng),比較觀察細(xì)胞的增殖能力,直觀分析細(xì)胞AKP的檢測(cè)結(jié)果;3.用改良RPMI-1640培基對(duì)Sj尾蚴細(xì)胞進(jìn)行原代和傳代培養(yǎng),用HE染色和掃描電鏡

2、觀察細(xì)胞一般形態(tài)和超微結(jié)構(gòu),用SDS-PAGE和ELISA法分析其抗原組分,用免疫熒光法和凝集試驗(yàn)檢測(cè)其抗原性.結(jié)果:1.日本血吸蟲染色體2n=16,2號(hào)為性染色體,核型公式為2n=6st+8sm+2m,各對(duì)染色體均顯示出各自特征性G帶帶型;2.對(duì)組織細(xì)胞增殖相觀察和AKP(％)的直觀分析結(jié)果表明,促進(jìn)細(xì)胞增殖的最佳組合為轉(zhuǎn)鐵蛋白,單核苷酸和b-FGF;3.尾蚴細(xì)胞形態(tài)觀察表明,其平均大小為3.5μM直徑,最小僅1μM直徑;HE染色后,

3、細(xì)胞呈高核質(zhì)比率,少數(shù)胞漿較豐富;掃描電鏡下,有的細(xì)胞表面布滿細(xì)小微絨毛,有的呈乳突樣突起,凹窩及小孔,有的胞質(zhì)形成皺折和突起;原代與傳代培養(yǎng)細(xì)胞抗原組分存在差異,其傳代細(xì)胞能與抗尾蚴血清發(fā)生特異性反應(yīng).結(jié)論:1.為血吸蟲培養(yǎng)細(xì)胞鑒定提供了染色體核型及其G帶帶型分析的方法:2.證明轉(zhuǎn)鐵蛋白,核苷酸和b-FGF對(duì)Sj童蟲細(xì)胞增殖具有明顯促進(jìn)作用:3.對(duì)Sj尾蚴細(xì)胞培養(yǎng)獲得傳代結(jié)果,并初步鑒定了培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征,證明尾蚴傳代細(xì)胞具有免疫