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1、miRNAs是一類(lèi)大小約22個(gè)核苷酸(nts)的內(nèi)源性非編碼小RNAs,通過(guò)與mRNA3'UTR完全或不完全互補(bǔ)結(jié)合降解靶mRNAs或抑制其翻譯,參與細(xì)胞增殖、分化、代謝和凋亡等過(guò)程。前期研究發(fā)現(xiàn)miR-29c在胃癌中的表達(dá)量明顯下降,并預(yù)測(cè)抗凋亡基因Mcl-1為miR-29的靶基因之一,其在胃癌組織中高表達(dá)并與miR-29e的表達(dá)呈反比相關(guān)。
本研究構(gòu)建相關(guān)載體并應(yīng)用熒光素酶報(bào)告基因技術(shù)進(jìn)一步證實(shí)miR-29b/c與Mc
2、l-1靶向作用關(guān)系。用Western blot檢測(cè)10例胃癌組織中Mcl-1蛋白表達(dá)情況。通過(guò)細(xì)胞轉(zhuǎn)染,在胃癌細(xì)胞BGC-823中高表達(dá)miR-29b/c,用實(shí)時(shí)定量PCR及Westernblot分別檢測(cè)Mcl-1 mRNA和Mcl-1蛋白的表達(dá)變化,并采用WTT試驗(yàn),DAPI染色,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞增殖、凋亡、細(xì)胞周期和藥物敏感性的影響。
結(jié)果發(fā)現(xiàn),胃癌組織中Mcl-1蛋白表達(dá)下降,miR-29b/c可以通過(guò)直接作用
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