卵巢對低氧性大鼠肺動(dòng)脈高壓模型中血管緊張素轉(zhuǎn)化酶-血管緊張素Ⅱ-血管緊張素1型受體的影響.pdf

1、目的:肺動(dòng)脈高壓(PAH)存在諸多病因，腎素-血管緊張素系統(tǒng)(renin-angiotensin system，RAS)在維持血壓和體內(nèi)水鹽平衡方面起至關(guān)重要的作用，血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(angiotensin-converting enzyme，ACE)-血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)-血管緊張素1型受體(angiotensinⅡ type1receptor，AT1R)軸的活動(dòng)異常可以導(dǎo)致肺血管收縮、肺血管平滑肌細(xì)胞增

2、殖以及促進(jìn)炎癥等，在PAH的發(fā)生及發(fā)展過程中具有重要作用。本研究旨在通過建立長期慢性低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠模型，觀察切除大鼠卵巢后血管緊張素轉(zhuǎn)化酶-血管緊張素Ⅱ-血管緊張素1型受體的變化，探討卵巢在大鼠肺動(dòng)脈高壓發(fā)病過程中的作用。
　　方法:
　　1.建立模型:SD雌性大鼠40只，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周。隨機(jī)分為對照組、卵巢切除組、低氧組、低氧加卵巢切除組，每組10只。低氧條件:常壓低氧箱內(nèi)，保持箱內(nèi)氧濃度為（10±0.5）％，以鈉石

3、灰和無水氯化鈣吸收多余的二氧化碳和水蒸氣，控制二氧化碳濃度低于0.5％，每天持續(xù)低氧24小時(shí)，連續(xù)8周。卵巢切除術(shù):打開其腹腔，沿輸卵管找到卵巢，結(jié)扎卵巢下方輸卵管及營養(yǎng)血管，切除卵巢，關(guān)閉腹腔，U字縫合皮膚。
　　2.長期低氧大鼠肺動(dòng)脈壓力變化:8周后用右心導(dǎo)管法測定大鼠平均肺動(dòng)脈壓(mean pulmonary artery pressure，mPAP)，以放血的方式處死大鼠。稱量法計(jì)算右心室肥大指數(shù)(right ventri

4、cule hypertrophy index，RVHI)，HE染色進(jìn)行肺小動(dòng)脈重塑(hypoxic pulmonary artery remodeling，HPSR)觀察。
　　3.采用放射免疫法測定血漿、肺組織AngⅡ的濃度。
　　4.應(yīng)用紫外分光光度法測定血清、肺組織ACE的活性。
　　5.應(yīng)用Western blot測定肺組織AT1R蛋白的表達(dá)。
　　6.應(yīng)用RT-PCR測定肺組織AT1R mRNA和肺動(dòng)脈

5、ACE mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.大鼠的一般狀況:低氧組大鼠在放入低氧箱8周后出現(xiàn)毛色晦暗、虹膜暗紅、呼吸急促、進(jìn)食減少，隨著低氧時(shí)間的延長，大鼠活動(dòng)度逐漸減少，最終以靜臥為主，未出現(xiàn)死亡。對照組、卵巢切除組、低氧組、低氧加卵巢切除組大鼠體重分別為(246.7±31.2)g，(237.9±30.2)g，(221.0±26.4)g，(210.6±26.0)g。與對照組比較，卵巢切除組大鼠體重變化不明顯（P＞0.05

6、），低氧組大鼠體重增長緩慢（P＜0.05），低氧加卵巢切除組大鼠體重增長明顯緩慢(P＜0.01)。
　　2.大鼠肺動(dòng)脈壓力變化:8周后成功建立大鼠PAH模型，對照組、卵巢切除組、低氧組、低氧加卵巢切除組大鼠mPAP分別為(12.6±1.76)mmHg，(13.2±0.84)mmHg，(29.3±2.21)mmHg，(30.9±1.64)mmHg。與對照組比較，卵巢切除組大鼠mPAP變化不明顯(P＞0.05），低氧組大鼠mPAP升高

7、(P＜0.05），低氧加卵巢切除組大鼠mPAP明顯升高(P＜0.01)。
　　3.長期低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠肺動(dòng)脈及右心室形態(tài)學(xué)變化:8周后，對照組、卵巢切除組、低氧組、低氧加卵巢切除組大鼠RVHI分別為(0.233±0.029)，(0.236±0.032)，(0.331±0.032)，(0.433±0.033)。與對照組比較，卵巢切除組大鼠RVHI變化不明顯(P＞0.05），低氧組大鼠RVHI增厚(P＜0.05），低氧加卵巢切除組

8、大鼠RVHI明顯增厚(P＜0.01)。與對照組比較，卵巢切除組形態(tài)學(xué)變化不明顯，低氧組的大鼠肺內(nèi)血管壁明顯增厚，肺細(xì)小動(dòng)脈中膜平滑肌細(xì)胞(SMC)增多，中膜(PAMT)增厚，管腔變窄;并且右心室肥厚，低氧加卵巢切除組的大鼠形態(tài)學(xué)表現(xiàn)更為明顯。
　　4.應(yīng)用紫外分光光度法測定大鼠血清、肺組織ACE活性:對照組、卵巢切除組、低氧組、低氧加卵巢切除組大鼠血清ACE活性分別為(17.27±4.15)U/ml,(40.84±9.48)U/m

9、l,(57.37±3.11)U/ml,(69.86±7.69)U/ml;對照組、卵巢切除組、低氧組、低氧加卵巢切除組大鼠肺組織ACE活性分別為(23.37±2.79)U/mg，(35.28±0.87)U/mg，(42.79±1.25)U/mg，(51.00±2.39)U/mg。與對照組比較，卵巢切除組大鼠血清、肺組織ACE活性輕度升高(P＜0.01)，低氧組大鼠血清、肺組織ACE活性明顯升高(P＜0.01)，低氧加卵巢切除組大鼠血清、肺

10、組織ACE活性升高最為明顯(P＜0.01)。
　　5.應(yīng)用RT-PCR分析大鼠肺動(dòng)脈ACE mRNA的表達(dá):對照組、卵巢切除組、低氧組、低氧加卵巢切除組大鼠肺動(dòng)脈ACE mRNA表達(dá)分別為(0.23±0.08)，(0.37±0.11)，(0.49±0.16)，(0.52±0.06)。與對照組比較，卵巢切除組大鼠肺動(dòng)脈ACE mRNA表達(dá)輕度升高(P＜0.05)，低氧組大鼠肺動(dòng)脈ACE mRNA表達(dá)明顯升高（P＜0.05），低氧加卵

11、巢切除組大鼠肺動(dòng)脈ACEmRNA表達(dá)升高最為明顯(P＜0.01)。
　　6.應(yīng)用RIA測定大鼠血漿、肺組織AngⅡ濃度:對照組、卵巢切除組、低氧組、低氧加卵巢切除組大鼠血漿AngⅡ濃度分別為(332.83±70.26)pg/ml,(423.15±33.57)pg/ml,(516.51±9.76)pg/ml,(823.05±55.27)pg/ml。對照組、卵巢切除組、低氧組、低氧加卵巢切除組大鼠肺組織AngⅡ濃度分別為(716.64

12、±122.6)pg/ml，(1029.22±124.68)pg/ml,(1392.76±10.34) pg/ml,(1583.78±96.85)pg/ml。與對照組比較，卵巢切除組大鼠血漿、肺組織AngⅡ濃度輕度升高(P＜0.05)，低氧組的大鼠血漿、肺組織AngⅡ濃度明顯升高(P＜0.01），低氧加卵巢切除組大鼠血漿、肺組織AngⅡ濃度升高最為明顯(P＜0.01)。
　　7.應(yīng)用Western blot檢測大鼠肺組織AT1R蛋白

13、的表達(dá):對照組、卵巢切除組、低氧組、低氧加卵巢切除組大鼠肺組織AT1R蛋白表達(dá)分別為(0.24±0.02)，(0.41±0.05)，(0.58±0.09)，(0.69±0.07)。與對照組比較，卵巢切除組大鼠肺組織的AT1R蛋白表達(dá)輕度升高(P＜0.05)，低氧組的大鼠肺組織AT1R蛋白表達(dá)明顯升高(P＜0.01），低氧加卵巢切除組的大鼠肺組織AT1R蛋白表達(dá)升高最為明顯(P＜0.01)。
　　8.應(yīng)用RT-PCR分析大鼠肺組織A

14、T1R mRNA的表達(dá):對照組、卵巢切除組、低氧組、低氧加卵巢切除組大鼠肺組織AT1R mRNA表達(dá)分別為(0.12±0.05)，(0.29±0.08)，(0.44±0.07)，(0.51±0.12)。與對照組比較，卵巢切除組大鼠肺組織中AT1R mRNA表達(dá)輕度升高(P＜0.05)，低氧組大鼠肺組織AT1R mRNA表達(dá)明顯升高(P＜0.01），低氧加卵巢切除組大鼠肺組織AT1R mRNA表達(dá)升高最為明顯(P＜0.01)。
　　

15、結(jié)論:
　　1.低氧條件下，肺、血中血管緊張素轉(zhuǎn)化酶、血管緊張素Ⅱ及血管緊張素1型受體的表達(dá)上調(diào)，可能在大鼠低氧性肺動(dòng)脈高壓的發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用。
　　2.卵巢切除條件下，8周后未形成肺動(dòng)脈高壓，但是大鼠體內(nèi)血管緊張素轉(zhuǎn)化酶、血管緊張素Ⅱ及血管緊張素1型受體表達(dá)均已上調(diào)。
　　3.低氧加卵巢切除條件下，與單純低氧組相比，肺動(dòng)脈壓力及體內(nèi)血管緊張素轉(zhuǎn)化酶、血管緊張素Ⅱ及血管緊張素1型受體表達(dá)均明顯升高，說明卵巢切除在