枸杞中抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶有效成分的篩選.pdf

1、高血壓是一種常見病、多發(fā)病，具有“三高三低”的特點(diǎn)，即高發(fā)病率、高致殘率、高死亡率;低知曉率、低服藥率、低控制率。因此，如何針對(duì)高血壓的特點(diǎn)有效的控制高血壓已經(jīng)成為醫(yī)學(xué)界關(guān)注的焦點(diǎn)。目前市場(chǎng)上主要的的降血壓藥物大多是合成藥物，雖然療效比較好，但是基本上都有作用時(shí)間短、依賴性較強(qiáng)、毒副作用大等問題。我國(guó)中藥資源豐富，且有悠久的用藥歷史，藥物藥效穩(wěn)定、安全。因此，尋找有效降血壓的中藥以及開發(fā)降血壓的中藥產(chǎn)品具有重要的現(xiàn)實(shí)意義?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明，

2、構(gòu)杞具有降血壓、降血糖、調(diào)節(jié)免疫、抗疲勞、抗癌、抗氧化等多種生物活性。然而，枸杞降血壓的機(jī)制和有效成分尚不明朗，因此有必要對(duì)枸杞中降血壓的活性成分做全面、深入的研究。本研究用血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)模型為手段，對(duì)枸杞的降壓活性做全面評(píng)價(jià)，利用高速逆流色譜(HSCCC)對(duì)枸杞中的活性成分進(jìn)行制備型分離。期望能夠獲得枸杞中具有降血壓的單體成分，為下一步藥理研究奠定基礎(chǔ)。
　　 本研究的主要內(nèi)容有:(1)ACE粗酶的提取以及用高效液

3、相色譜法(HPLC)測(cè)定ACE的活性;(2)以ACE為靶標(biāo)，評(píng)價(jià)32味中藥對(duì)ACE抑制作用的活性;(3)采用D-101大孔樹脂對(duì)枸杞的乙醇提取物進(jìn)行粗分，同時(shí)以ACE追蹤大孔樹脂的活性部位;(4)采用硅膠柱層析和凝膠柱層析對(duì)大孔樹脂中活性最高的部位進(jìn)行分離純化并以ACE為靶標(biāo)進(jìn)行活性部位及活性成分的追蹤;(5)采用D-101大孔樹脂對(duì)枸杞的乙醇提取物進(jìn)行除雜和粗分后，用HSCCC以氯仿-甲醇-水(10∶7∶3，v/v/v)為溶劑體系，對(duì)

4、枸杞中的莨菪亭進(jìn)行了制備型分離。
　　 通過以上實(shí)驗(yàn)得到結(jié)果如下:
　　 (1)用梯度冷凍離心法從新鮮兔肺中提取得到ACE粗酶，其活性較高。用底物馬尿酰-組氨酰-亮氨酸(HHL)-ACE為反應(yīng)體系，HPLC法測(cè)定反應(yīng)體系中馬尿酸(Hip)含量，Hip的峰面積與ACE濃度呈很好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r2=0.99，說明此法可以精確檢測(cè)ACE的活性，能夠反映酶與底物的反應(yīng)程度，從而確定酶的合適劑量。
　　 (2)對(duì)32

5、味中藥進(jìn)行ACE的活性評(píng)價(jià)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:32味藥材中，澤瀉、決明子、知母、山楂、五味子、黃芪、佛手、枸杞對(duì)ACE的抑制率都高于60％，其中枸杞的抑制率最高，達(dá)到92.30％，說明枸杞中含有能有效抑制ACE的活性成分。因此，選取枸杞進(jìn)行下一步的研究。
　　 (3)用D-101大孔樹脂對(duì)枸杞乙醇提取物粗分，得到6個(gè)部位，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:50％的乙醇洗脫部位活性最高，抑制率達(dá)到35.46％。
　　 (4)用柱層析方法分離活性部

6、位中的有效成分，硅膠柱層析粗分得到7個(gè)洗脫部位，其中乙酸乙酯-甲醇(6∶4)洗脫部位活性最高，抑制率達(dá)到56.26％。用硅膠柱層析和和凝膠柱層析進(jìn)行再次分離，得到6個(gè)化合物，其中莨菪亭糖苷類這個(gè)化合物活性最高，抑制率達(dá)到96.67％，初步認(rèn)定枸杞中抑制ACE的活性物質(zhì)為莨菪亭糖苷類化合物。
　　 (5)用高速逆流色譜法對(duì)枸杞的乙醇提取物中的大孔樹脂50％乙醇洗脫部分進(jìn)行了分離，經(jīng)薄層色譜-熒光分析法篩選高速逆流色譜的溶劑體系。用