血管緊張素Ⅱ—血管緊張素Ⅱ1型受體途徑在介導(dǎo)急性肺損傷大鼠肺部炎癥反應(yīng)中的作用研究.pdf

1、第一部分，目的：探討血管緊張素Ⅱ(Ang Ⅱ)介導(dǎo)大鼠肺部炎癥反應(yīng)激活的作用及其受體途徑。 方法：清潔級(jí)SD大鼠24只，隨機(jī)分為4組：①對(duì)照組：持續(xù)皮下注射與AngⅡ等體積的生理鹽水72 h；②AngⅡ組：皮下注射AngⅡ1μg·kg<'-1>．min<'-1>持續(xù)72 h；③AngⅡ+氯沙坦組：Ang Ⅱ注射前24 h及Ang Ⅱ持續(xù)皮下注射的72 h過(guò)程中，予氯沙坦10 mg.kg<'-1>·d<'-1>灌胃；④氯沙坦組：氯

2、沙坦10mg.kg<'-1>·d<'-1>灌胃4 d。光鏡觀察肺組織病理改變并測(cè)定肺組織肺濕/干重比(W/D)。凝膠遷移率改變電泳法(EMSA)測(cè)定肺組織核因子-κB(NF-κB)活性，逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)肺組織腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、Ang Ⅱ 1型受體(ATR1)mRNA表達(dá)水平，酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定血漿中血管性血友病因子(vWF)的含量反映內(nèi)皮細(xì)胞損傷，比色法測(cè)定髓過(guò)氧化物酶(MPO)和丙二

3、醛(MDA)含量，TUNEL分析肺組織細(xì)胞凋亡情況，Western Blot方法檢測(cè)肺組織ATR1蛋白表達(dá)水平。 結(jié)果：AngⅡ組大鼠肺W/D為(4.80±0.23)，明顯高于對(duì)照組(4.26±0.34)、Ang Ⅱ+氯沙坦組(4.13±0.48)和氯沙坦組(3.80±0.48)(P<0.05)。Ang Ⅱ+氯沙坦組肺W/D明顯低于AngⅡ組，但與對(duì)照組和氯沙坦組相比無(wú)顯著差異(P>0.05)。AngⅡ可導(dǎo)致肺泡間隔增寬、出血及

4、大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等急性肺損傷病理改變，預(yù)先應(yīng)用氯沙坦阻斷AngⅡ1型受體ATR1可緩解由AngⅡ所致的肺組織病理?yè)p傷。AngⅡ組肺組織NF-κB活性、TNF-α mRNA表達(dá)、MPO、MDA及vWF含量均明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，Ang Ⅱ+氯沙坦組肺組織NF-κB活性、TNF-αmRNA表達(dá)、MPO、MDA及vWF含量較AngⅡ組明顯下降，但與對(duì)照組和氯沙坦組相比無(wú)顯著差異(P>0.05)。Ang Ⅱ組支氣管上皮細(xì)胞、肺泡上皮細(xì)

5、胞TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較對(duì)照組明顯增加，AngⅡ+氯沙坦組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較AngⅡ組明顯下降，但仍顯著高于對(duì)照組及氯沙坦組水平(P<0.05)。AngⅡ組ATR1mRNA表達(dá)水平明顯高與對(duì)照組、AngⅡ+氯沙坦組及氯沙坦組，但對(duì)照組、AngⅡ組、AngⅡ+氯沙坦組和氯沙坦組ATR1蛋白表達(dá)水平無(wú)顯著差異(P>0.05)。 結(jié)論：AngⅡ可激活肺部炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡并導(dǎo)致急性肺損傷，AngⅡ在肺部的促炎作用主要是通過(guò)其1型受體介導(dǎo)的。

6、 第二部分，目的：探討血管緊張素Ⅱ(Ang Ⅱ)通過(guò)血管緊張素Ⅱ1型受體(ATR1)途徑在介導(dǎo)脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的急性肺損傷大鼠肺部炎癥反應(yīng)中的作用。 方法：清潔級(jí)SD大鼠18只，隨機(jī)分為：①對(duì)照組：靜脈注射與LPS等量的生理鹽水；②ALI組：靜脈注射LPS 10 mg/kg復(fù)制ALI模型；③ALI+氯沙坦組：靜脈注射LPS 10 mg/kg前30 min，予以靜脈注射losartan 20 ug/kg并以20 ugk

7、g<'-1>．min<'-1>持續(xù)靜脈泵入。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中股動(dòng)脈置管每小時(shí)監(jiān)測(cè)平均動(dòng)脈壓(MAP)，LPS注射6h后處死動(dòng)物。另18只SD大鼠進(jìn)行LPSR寸血漿及肺組織Ang Ⅱ濃度影響實(shí)驗(yàn)。大鼠隨機(jī)分為：LPS 3 h組、LPS 9 h組和LPS 12 h組，分別在LPS注射3、9和12 h后處死。光鏡觀察肺組織病理改變并測(cè)定肺組織肺濕/干重比(W/D)。放射免疫分析法測(cè)定血漿及肺組織Ang Ⅱ濃度。凝膠遷移率改變電泳法(EMSA)測(cè)定肺

8、組織核因子-κB(NF-κB)活性，逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)肺組織腫瘤壞死因子-α(TNF-α)及ATR1 mRNA表達(dá)水平，酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定血漿中血管性血友病因子(vWF)的含量反映內(nèi)皮細(xì)胞損傷，比色法測(cè)定髓過(guò)氧化物酶(MPO)和丙二醛(MDA)含量，TUNEL分析肺組織細(xì)胞凋亡情況，Western Blot方法檢測(cè)肺組織ATR1蛋白表達(dá)水平。 結(jié)果：對(duì)照組大鼠實(shí)驗(yàn)過(guò)程中MAP維持穩(wěn)定，ALI組

9、及ALI+氯沙坦組大鼠LPS注射后MAP均明顯下降，但相同時(shí)間點(diǎn)ALI和ALI+氯沙坦組MAP無(wú)明顯差異。ALI組肺組織W/D為(5.02±0.0.18)，明顯高于對(duì)照組(3.39±0.32)。應(yīng)用氯沙坦組預(yù)先阻斷ATR1(ALI+氯沙坦組)可使肺組織W/D(4.68±0.60)較ALI組明顯下降，但仍顯著高于對(duì)照組水平(P<0.05)。LPS誘導(dǎo)ALI肺組織病理檢查見(jiàn)肺泡萎陷，肺泡間隔增寬，肺泡間質(zhì)內(nèi)大量出血及炎細(xì)胞滲出，肺泡間質(zhì)血管

10、充血，應(yīng)用氯沙坦預(yù)先阻斷ATR1受體可使ALI大鼠肺組織病理?yè)p傷明顯減輕。LPS注射后，大鼠血漿及肺組織Ang Ⅱ濃度均逐漸升高，9h時(shí)達(dá)峰值。ALI組肺組織NF-κB活性、TNF-αmRNA表達(dá)、MPO、MDA、vWF含量及凋亡指數(shù)均明顯高于對(duì)照組，應(yīng)用氯沙坦組預(yù)先阻斷ATR1受體可使ALI大鼠肺組織上述指標(biāo)明顯下降，但NF-κB活性、MPO含量及凋亡指數(shù)仍明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。ALI組TUNEL染色見(jiàn)支氣管上皮細(xì)胞、肺泡上

11、皮細(xì)胞TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞較對(duì)照組數(shù)明顯增加，ALI+氯沙坦組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較ALI組明顯下降，但仍顯著高于對(duì)照組水平。LPS刺激可導(dǎo)致大鼠肺ATR1 mRNA及蛋白表達(dá)水平明顯升高，預(yù)先用氯沙坦阻斷ATR1受體可使ATR1 mRNA表達(dá)明顯下降(P<0.05)，但對(duì)ATR1蛋白表達(dá)影響不明顯(P>0.05)。 結(jié)論：LPS誘導(dǎo)ALI時(shí)，升高的AngⅡ可通過(guò)ATR1途徑加重肺部炎癥反應(yīng)，損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞并促進(jìn)肺組織細(xì)胞調(diào)亡，阻斷ATR