酪蛋白來源血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制肽的研究.pdf

1、在現(xiàn)代社會中，高血壓是流行最為廣泛的心血管疾病，而在高血壓人群中有95％以上的患者是原發(fā)性高血壓。血管緊張素轉(zhuǎn)化酶是血壓調(diào)節(jié)中的一個重要因子，它的抑制因子可以有效地降低血壓。酪蛋白是乳中含量最高的蛋白質(zhì)，酪蛋白經(jīng)酶水解得到的肽片段對血管緊張素轉(zhuǎn)化酶具有較高的親和力，并與其結(jié)合，從而抑制ACE的催化作用，具有降低血壓的作用。并且該肽被證明主要降低原發(fā)性高血壓。同時，酪蛋白及其水解得到的肽被證明具有抗氧化的活性，可以作為天然抗氧化成分添加到

2、食品及化妝品中。
　　 活性肽一般都是以無活性的形式存在于蛋白質(zhì)序列中，蛋白質(zhì)通過加熱、酸堿水解、蛋白酶解或微生物發(fā)酵等加工過程時，成為有功能的活性肽。加熱和酸堿處理蛋白條件劇烈，會對原料造成很大的破壞，而且后處理工序繁瑣，專一性不強；而酶解方法條件溫和，對環(huán)境污染小，簡便可靠，所以，目前生產(chǎn)生物活性肽普遍采用酶解法。同時，通過酶解酪蛋白生產(chǎn)生物活性膚，與化學(xué)合成法和基因工程方法生產(chǎn)生物活性肽相比，其原料廉價、成本低、安全性好。

3、本文以胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和木瓜蛋白酶作為水解酪蛋白的備選用酶，選出最佳水解酶，然后以水解度和水解物體外血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制活性為指標(biāo)對其水解條件進行優(yōu)化，得到最佳水解條件下的水解產(chǎn)物，并對產(chǎn)物進行分離純化及分析，最后研究了酪蛋白及其水解物的體外抗氧化活性。
　　 首先，對胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和木瓜蛋白酶進行酶的活力的測定并分析了酪蛋白成分，主要是測定蛋白氮的含量，得到酪蛋白的蛋白含量約為88％。然后用三種酶在相同的條件下水

4、解酪蛋白，通過不同時間水解度和水解物的體外對血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的抑制作用的選出最佳水解用酶進行水解反應(yīng)。經(jīng)過比較，三種酶中胰蛋白酶水解物無論從水解度還是ACE抑制活性上都要高于其它兩種酶的水解物，因此選擇胰蛋白酶作為水解用酶進行下面的研究。
　　 其次以酪蛋白為底物，用最佳水解用酶進行水解條件的優(yōu)化，包括單因素試驗和正交試驗，確定最佳的水解條件。經(jīng)過單因素試驗和正交試驗的分析得到最佳的水解條件為45℃，pH為7，酶與底物的比例為6

5、/1000，底物濃度為2％，水解時間為12h。
　　 再次，進行水解物的初步分離純化及分子量的測定。本試驗選用超濾的方法進行粗分離，得到分子量小于3000道爾頓的組分。然后用聚丙烯酰胺凝膠色譜Bio-gel p2進行進一步分離并測定ACE抑制活性，該方法利用分子篩的原理將不同分子量的肽分開，再將收集的組分用高效液相色譜進行分析分離，最后用液相色譜-質(zhì)譜串聯(lián)分析得到的肽的分子量范圍。
　　 最后對所酪蛋白及其水解物進行了抗

6、氧化活性的研究。測定了酪蛋白及胰蛋白酶水解酪蛋白得到的水解物的抗氧化活性，包括總抗氧化能力、還原力、清除DPPH自由基的能力、清除超氧陰離子自由基的能力和螯合金屬離子的能力的測定。結(jié)果顯示，酪蛋白溶液、酪蛋白水解液和水解液中分子量小于3000道爾頓的組分均有一定的抗氧化活性，特別是清除DPPH自由基和螯合鐵離子的效果比較好。它們的抗氧化活性都隨濃度的增高而升高。其中，相同濃度下，以小分子量的組分的抗氧化活性最高，酪蛋白溶液的活性最低，水